TaqMan探針?lè)╭PCR是使用TaqMan熒光探針進(jìn)行熒光檢測(cè)的方法。其基本原理是PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針，該探針兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。開(kāi)始時(shí)，探針完整地結(jié)合在DNA任意一條單鏈上，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收，檢測(cè)不到熒光信號(hào)；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5'-3'核酸外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而發(fā)出熒光，切割的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比，因此，通過(guò)檢測(cè)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度可以達(dá)到檢測(cè)PCR產(chǎn)物擴(kuò)增量的目的。

圖. TaqMan水解探針作用機(jī)理圖

 1   特異性高、定量準(zhǔn)確

 2   實(shí)驗(yàn)耗時(shí)短

因探針?lè)?span style="margin: 0px; padding: 0px; line-height: 22.5px; letter-spacing: normal; overflow-wrap: normal !important;">qPCR的高特異性，故無(wú)需再設(shè)置熔解曲線檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物的特異性如何，大大縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。

 3   兼容多重反應(yīng)

不同波長(zhǎng)的熒光報(bào)告基團(tuán)可以標(biāo)記不同的探針，因此可以在同一個(gè)反應(yīng)體系中利用不同熒光標(biāo)記的探針同時(shí)檢測(cè)多個(gè)靶標(biāo)，達(dá)到節(jié)省實(shí)驗(yàn)成本的目的。

 1   核酸定量分析

Taqman qPCR技術(shù)可對(duì)傳染性疾病進(jìn)行定量定性分析，包括病原微生物或病毒含量的檢測(cè)，轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物轉(zhuǎn)基因拷貝數(shù)的檢測(cè)，RNAi基因失活率的檢測(cè)等。

 2   基因表達(dá)差異分析

 3   基因型/等位基因分析

單核苷酸多態(tài)性（SNPs）是由DNA序列中同一個(gè)位置上的堿基對(duì)的常見(jiàn)替換造成的個(gè)體DNA序列差異。SNP在人類(lèi)基因組中數(shù)量較多，發(fā)生頻率較高，檢測(cè)單核苷酸多態(tài)性對(duì)于研究個(gè)體對(duì)不同疾病的易感性或者個(gè)體對(duì)特定藥物的不同反應(yīng)有著重要的意義。

 4   藥物開(kāi)發(fā)研究

 5   無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前檢查

 6   腫瘤基因檢測(cè)

盡管腫瘤發(fā)病的機(jī)理尚未清楚，但相關(guān)基因發(fā)生突變是致癌性轉(zhuǎn)變的根本原因已被廣泛接受。癌基因的表達(dá)增加和突變，在許多腫瘤早期就可以出現(xiàn)。

目前用此方法已進(jìn)行過(guò)端粒酶hTERT基因、慢性粒細(xì)胞性白血病WT1基因、腫瘤ER基因、前列腺癌PSM基因、腫瘤相關(guān)的病毒基因等多種基因的表達(dá)檢測(cè)。

 7   病原體檢測(cè)

Taqman qPCR可以對(duì)多種病原體（如人類(lèi)乳頭瘤病毒、人類(lèi)免疫缺陷病毒、肝炎病毒、流感病毒及非洲豬瘟病毒）進(jìn)行定量測(cè)定。該技術(shù)對(duì)病原體的檢測(cè)解決了免疫學(xué)檢測(cè)的“窗口期”問(wèn)題，可判斷疾病是否處于隱性或亞臨床狀態(tài)，適用于傳染病早期的大規(guī)模確診。

非洲豬瘟是由非洲豬瘟病毒（ASFV）感染家豬或野豬引起的一種急性、烈性、高度接觸性傳染病，其發(fā)病率和死亡率可達(dá)100%，嚴(yán)重危害著全球養(yǎng)豬業(yè)，造成難以估量的經(jīng)濟(jì)損失。

目前非洲豬瘟沒(méi)有疫苗和有效的治療手段，qPCR法是OIE推薦使用的非洲豬瘟常規(guī)診斷的重要工具，也是中國(guó)在現(xiàn)階段非洲豬瘟流行情況下的檢測(cè)技術(shù)。