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01
Nucleofection™核轉(zhuǎn)的處理 –
簡單的操作方案
步驟一：
獲取目標細胞
步驟二：
混合和結(jié)合
轉(zhuǎn)移至Lonza認證的電轉(zhuǎn)杯或電轉(zhuǎn)板條中
步驟三：
選擇Nucleofector™程序，放入電轉(zhuǎn)耗材，按下開始按鈕
步驟四：
用培養(yǎng)基將電轉(zhuǎn)耗材的細胞轉(zhuǎn)移出來
步驟五:
轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)皿中。Nucleofection™電轉(zhuǎn)后3-8小時即可檢驗
02
提高Nucleofection™核轉(zhuǎn)效率
小技巧：
1.準備好加了新鮮培養(yǎng)基的多孔板，并在實驗前于37°C下預(yù)平衡。
2.使用傳代次數(shù)少并具有融合度或密度（對數(shù)生長）的細胞。
3.限制胰蛋白酶暴露時間，仔細監(jiān)測細胞分離情況。
4.根據(jù)優(yōu)化方案進行細胞計數(shù)并使用適量細胞數(shù)；所用細胞過少可能導(dǎo)致細胞死亡率增加。
5.采用高質(zhì)量DNA，使用內(nèi)毒素去除試劑盒進行純化；請通過測定A260:A280比值檢查各質(zhì)粒制備液的純度。
6.室溫下以離心速度80-100×g和方案規(guī)定的時間進行離心。
7.離心后加入Nucleofector™溶液，混勻溶液/細胞沉淀制備成單細胞懸液，避免對細胞沉淀進行額外操作或用移液器槍頭抽吸。
8.Nucleofection™核轉(zhuǎn)后，用核轉(zhuǎn)試劑盒內(nèi)配的一次性移液管在電轉(zhuǎn)耗材中的細胞頂部加入約500μL預(yù)熱培養(yǎng)基。
•輕輕將一次性移液管吸頭置于電轉(zhuǎn)耗材底部，收集細胞
•將細胞懸液輕輕接種至制備的多孔板中
•請勿重復(fù)抽吸混合細胞
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