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單細(xì)胞分離對(duì)于很多應(yīng)用場(chǎng)景如，單細(xì)胞測(cè)序，單克隆培養(yǎng)等而言是關(guān)鍵的前處理步驟，殊不知單細(xì)胞分離的前處理步驟也有很多需要注意的地方。下面我們就來(lái)了解一下，為了提高單細(xì)胞分離的效率和效果，都有哪些小竅門(mén)。
單細(xì)胞分離用于區(qū)分碎片、死細(xì)胞和活細(xì)胞，然后可以根據(jù)操作流程分離單個(gè)活細(xì)胞，為了去除細(xì)胞結(jié)團(tuán)，在染色之后可以用40um左右的細(xì)胞篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞，盡量保證在上樣的時(shí)候樣本都是單個(gè)細(xì)胞。
作為對(duì)照，我們采用細(xì)胞密度進(jìn)行手動(dòng)有限稀釋法鋪板。然后，用顯微鏡在明場(chǎng)下觀察每個(gè)孔的細(xì)胞（或者微球）的數(shù)量，同樣的實(shí)驗(yàn)持續(xù)7天，每天做一組對(duì)比實(shí)驗(yàn)，取平均值，通過(guò)統(tǒng)計(jì)孔板中單細(xì)胞、兩個(gè)細(xì)胞和空孔的數(shù)量來(lái)衡量?jī)x器的分選效率，可通過(guò)差速離心或密度梯度離心和過(guò)濾的方法，根據(jù)大小、形狀和密度對(duì)細(xì)胞進(jìn)行人工分離。
例如，通過(guò)各種密度梯度離心，可以從外周血或骨髓中分離出單核細(xì)胞，使用熒光染料可以從死細(xì)胞或凋亡細(xì)胞中標(biāo)記和分離活細(xì)胞，富集細(xì)胞亞群或稀有細(xì)胞類(lèi)型時(shí)，可將標(biāo)記抗體基于磁珠的分離方法相結(jié)合進(jìn)行陽(yáng)性/陰性篩選。多種因素將影響方法的選擇，包括樣本類(lèi)型、可用抗體種類(lèi)和實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。
它可以快速識(shí)別可能會(huì)使下游步驟變得復(fù)雜的碎片、細(xì)胞雙聯(lián)體和細(xì)胞聚集物，更重要的是，準(zhǔn)確的細(xì)胞計(jì)數(shù)對(duì)于實(shí)現(xiàn)單細(xì)胞分離過(guò)程的目標(biāo)細(xì)胞通量至關(guān)重要，可以使用顯微鏡和血細(xì)胞計(jì)數(shù)器進(jìn)行手動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)，也可以使用自動(dòng)化系統(tǒng)進(jìn)行準(zhǔn)確的細(xì)胞計(jì)數(shù)，采集細(xì)胞懸液的明場(chǎng)圖像，根據(jù)細(xì)胞特征（例如大小、亮度和圓度）生成直方圖進(jìn)行更詳細(xì)的檢查。
在以上步驟完結(jié)之后，我們就能得到一個(gè)好的單細(xì)胞懸液了。最后我們用Namocell單細(xì)胞分離儀完成后面的單細(xì)胞分離工作，最快可以在1min以?xún)?nèi)完成96孔板的鋪板，6min以?xún)?nèi)完成384孔板的鋪板，并且整版單細(xì)胞效率高達(dá)90%左右。
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