人細胞角蛋白20(CK-20)免疫組化試劑盒實驗步驟：

1.烤片： 將待做切片置于切片架上，于60℃恒溫烤箱中至少烤1 hr；石蠟包埋組織切片3~4μm 厚度

2.脫蠟： 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟3 次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次10 min；

3.水化： 切片經(jīng)下行酒精水化，無水乙醇5min，95%乙醇2 次（每次2min），85%乙醇2 min；75%乙醇2min，自來水沖洗，ddH2O 洗2×2min；

4.抗原修復(fù)： 根據(jù)抗體說明書推薦方法進行抗原修復(fù)，常采用高壓、微波（溫度達到98~100℃）或酶消化修復(fù)法，室溫自然冷卻，自來水沖洗，ddH2O 洗2×2min，TBS 洗滌（2×2min）（具體修復(fù)方法見附1）* 注：有些抗原勿需修復(fù)，

直接進入第5 步封閉。

5.封閉： 滴加試劑B，37℃濕盒孵育30 min；

6.加一抗：滴加用試劑C（即用型一抗），37℃濕盒孵育2 hr 或4℃過夜；

7.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min）；

8.封閉： 滴加試劑B，37℃濕盒孵育10 min；

9.加二抗： 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗（試劑D），37℃濕盒中孵育30 min；

10.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min）；

11.封閉： 滴加試劑Tween 20，37℃濕盒孵育封閉20 min；

12.加HRP-SA： 滴加用抗體稀釋液稀釋的試劑E（1：50~200，終濃度5~20 nM），37℃濕盒中孵育30 min；

13.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min），TBS 洗滌（2×5 min）；

14.顯色：應(yīng)用DAB 溶液（試劑F）顯色；

15.復(fù)染：自來水充分沖洗，復(fù)染，脫水，透明；

16.封片： 待組織標(biāo)本干后，用試劑緩沖甘油封固劑封片；

17.觀察成像： 顯微鏡下觀察成像。

糖尿病相關(guān)肽/胰島淀粉樣肽抗體

血管緊張素Ⅱ抗體

血管緊張素Ⅱ受體1抗體

血管生成素-1抗體

膜粘連蛋白5抗體

重組膜粘連蛋白5抗體

銜接蛋白α-Adaptin抗體

凋亡蛋白活性因子-1抗體（C端）

凋亡蛋白活性因子-1抗體（N端）

三磷酸腺苷結(jié)合轉(zhuǎn)運蛋白G超家族成員2抗體

載脂蛋白E抗體

淀粉樣肽前體蛋白抗體

水通道蛋白-2抗體

血管緊張素原抗體

雄激素受體抗體

細胞死亡調(diào)節(jié)蛋白抗體(凋亡、半胱胺酸蛋白酶激活抑制劑)

軸蛋白1抗體

自噬相關(guān)蛋白9B抗體

自噬相關(guān)蛋白12抗體

自噬相關(guān)蛋白13抗體

自噬相關(guān)蛋白3抗體

整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶4型抗體

磷酸化活化復(fù)制因子2抗體

磷酸化APP(Tyr757)淀粉樣肽前體蛋白抗體

絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶ATR抗體

去整合素樣金屬蛋白酶18抗體