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用溴甲酚紫法測定白蛋白含量的流程

來源:上海聯(lián)碩生物科技有限公司   2021年12月10日 08:48  

實(shí)驗(yàn)原理

溴甲酚紫法(BCP法)是一種測定白蛋白含量的方法。實(shí)驗(yàn)原理為在pH5.2的緩沖液中,有Brij-35存在時,溴甲酚紫(bromocresol puple,BCP)可與白蛋白結(jié)合形成綠色復(fù)合物,在波長603nm處的吸光度與白蛋白濃度成正比例,與同樣處理的白蛋白標(biāo)準(zhǔn)比較,可求得血清中白蛋白含量。

實(shí)驗(yàn)原理

在pH5.2的緩沖液中,有Brij-35存在時,溴甲酚紫(bromocresol puple,BCP)可與白蛋白結(jié)合形成綠色復(fù)合物,在波長603nm處的吸光度與白蛋白濃度成正比例,與同樣處理的白蛋白標(biāo)準(zhǔn)比較,可求得血清中白蛋白含量。

試劑與器材

1.250g/LBrij-35溶液見BCG法

2.50mmol/L BCP貯存液稱取BCP 675mg溶于無水乙醇15ml中,當(dāng)溶液變?yōu)槌壬该鲿r,用無水乙醇稀釋至25ml。置4C冰箱保存至少可穩(wěn)定3個月。

3.2.5mol/L醋酸溶液量取冰醋酸150ml用蒸餾水稀釋至1L。

4.BCP試劑稱取無水醋酸鈉6.03g(或三結(jié)晶水的醋酸鈉10g)溶于蒸餾水950ml中,加Brij-35液1ml,BCP貯存液1ml,用2.5mol/L醋酸溶液調(diào)pH至5.20+0.03(約需10ml),加蒸餾水至1L(BCP貯存液也可在調(diào)好pH后再加)。在室溫可穩(wěn)定一周。

5.0.154mol/L NaCl溶液稱取NaCl9g用蒸餾水溶解至1L。

6.白蛋白標(biāo)準(zhǔn)液采用人白蛋白或定值,切不可用動物血清蛋白。

操作步驟

1.生化自動分析儀分析法參數(shù)見有關(guān)儀器操作說明書。

2.手工操作法。

混勻,1min后在波長603nm處比色,用空白管調(diào)零,讀取測定管和標(biāo)準(zhǔn)管吸光度。

評價

本法反應(yīng)最適pH為5.20,接近α-和β-球蛋白的等電點(diǎn),抑制了這兩種球蛋白與BCP的非特異性反應(yīng),故對測定白蛋白具有高特異性。此外,BCP與白蛋白的反應(yīng)為即時*反應(yīng),不受時間和溫度變化的影響,呈色后穩(wěn)定1h以上。本法線性范圍5-50g/L,在10-40g呈線性良好,50g/l時稍偏低;CV為0.45%;回收率99.3%~102%,平均回收率100.5%.本法兼有BCG法的主要優(yōu)點(diǎn),克服了BCG法的多數(shù)缺點(diǎn),與火箭電泳法結(jié)果相一致,成為測定血清白蛋白燃料結(jié)合法中較好的一個方法。BCP與牛,豬(新鮮或凍干)血清反應(yīng)性僅為BCG反應(yīng)的1/3,不適用于動物血清白蛋白作質(zhì)量控制,機(jī)制尚待闡明。


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