操作ATCC細(xì)胞培養(yǎng)的具體方法，通蔚試劑（上海）有限公司生產(chǎn)的ATCC細(xì)胞，有門的生物技術(shù)售后團(tuán)隊，實驗中需要技術(shù)指導(dǎo)的話，可bo打公司技術(shù)線，有一對一的咨詢解答服務(wù)。

基本原理

經(jīng)過在支持物（如蓋玻片）上培養(yǎng)貼壁細(xì)胞，能夠應(yīng)用抗體檢測細(xì)胞表面抗原的表達(dá)或進(jìn)行酶細(xì)胞化學(xué)以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。該方法的長處是細(xì)胞貼壁健壯，能夠保持細(xì)胞生長時的情況。

試劑和設(shè)備細(xì)胞懸浮液；6孔平底安排培養(yǎng)板，或φ60 mm培養(yǎng)皿；

18mm x 18mm 或20mm x 20mm浸于75%乙醇中的蓋玻片；

含血清培養(yǎng)基（通常為 RMPI 1640,含10% 小牛血清，100U/ml青霉素，100μg/ml鏈霉素）；

超凈工作臺； CO2孵箱；蓋片鑷；

操作步驟
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭潔凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片悄悄放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至掩蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出用蓋片鑷悄悄取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

實驗關(guān)鍵及說明
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可運(yùn)用滴片法；
2．所運(yùn)用的蓋玻片應(yīng)該為玻璃制造，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片十分薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．假設(shè)需要更多生長情況共同的細(xì)胞，能夠運(yùn)用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以防止培養(yǎng)液的浪費和添加污染機(jī)
5．假設(shè)細(xì)胞貼壁生長才能較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并天然曬干。

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