細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)可謂是性?xún)r(jià)比高的一個(gè)小實(shí)驗(yàn)了。可以在不額外購(gòu)買(mǎi)實(shí)驗(yàn)設(shè)備的情況下，一定程度地評(píng)價(jià)腫瘤細(xì)胞或者成纖維細(xì)胞的遷移能力。

在課題組經(jīng)費(fèi)的限制下，這個(gè)實(shí)驗(yàn)成為很多老板的*。

細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)本身的操作很簡(jiǎn)單，網(wǎng)上有很多教程，此處不贅述。當(dāng)你辛辛苦苦拿到了下面這張照片時(shí)，說(shuō)明你已經(jīng)成功了一大半。

接下來(lái)的工作就是測(cè)量，本文將以此為例，寫(xiě)出測(cè)量的圖文教程。

1. 下載并安裝Image Pro Plus。

2. 點(diǎn)擊File→Open，打開(kāi)你需要測(cè)量的圖片。

3. 增強(qiáng)細(xì)胞劃痕邊界的信號(hào)，以提高IPP識(shí)別準(zhǔn)確度。點(diǎn)擊Process，點(diǎn)擊過(guò)濾器Filters。

（4.1）在Edge選項(xiàng)下，選擇Sobel。然后鼠標(biāo)拖右側(cè)的小窗口，將細(xì)胞劃痕的邊緣拖到這個(gè)窗口處，意在增強(qiáng)這個(gè)邊界。

點(diǎn)擊Apply之后，可以看到目標(biāo)圖片已經(jīng)發(fā)生改變，邊界更加清晰了。

（4.2）在Morphological選項(xiàng)下，選擇Close。然后鼠標(biāo)拖右側(cè)的小窗口，使得細(xì)胞占滿這個(gè)窗口。此步意在通過(guò)算法將細(xì)胞區(qū)域中的空隙都填充上顏色，以提高IPP的自動(dòng)識(shí)別準(zhǔn)確度。

點(diǎn)擊Apply之后，可以看到目標(biāo)圖片再次發(fā)生改變。

（4.3）在Enhancement選項(xiàng)下，選擇Lopass，選擇5X5，然后鼠標(biāo)拖右側(cè)的小窗口，使得劃痕邊界處在這個(gè)窗口。此步驟意在調(diào)整劃痕邊界的平滑度。

點(diǎn)擊Apply之后，可以看到目標(biāo)圖片又一次發(fā)生改變。

5. 增強(qiáng)圖片的對(duì)比度。

（5.1）點(diǎn)擊Enhance，選擇Contrast Enhancement，調(diào)出下面的設(shè)置界面彈窗。

（5.2）拉動(dòng)圖中的曲線，以獲取合適的對(duì)比度。（當(dāng)然你也可以點(diǎn)擊彈窗中Save選項(xiàng)，保存這個(gè)對(duì)比度文件。后面測(cè)量其它圖片時(shí)，到了這一步可以點(diǎn)擊Load調(diào)出設(shè)置文件。這種操作更有利于減小測(cè)量誤差。）

6. 點(diǎn)擊矩形工具，將圖中的細(xì)胞寬度框選。如下圖。

7. 點(diǎn)擊Measure中的count/size選項(xiàng)，彈框中點(diǎn)擊measrue，再點(diǎn)擊select measurement。測(cè)量參數(shù)選擇Area和Box Height。調(diào)整Area最小測(cè)量值為1000，以便于過(guò)濾小面積區(qū)域。（注意：如果你的細(xì)胞劃痕圖像是橫著的，那就要選擇Box width）。點(diǎn)擊OK。

8. 最關(guān)鍵的一步。在manual模式下，點(diǎn)擊select colors，進(jìn)入選色界面。在HSI模式下通過(guò)調(diào)整0-255數(shù)值或拉動(dòng)圖中曲線，保證我們畫(huà)的矩形選框中盡可能的被填滿紅色。

同樣的，你可以點(diǎn)擊彈窗中的File按鈕來(lái)保存你的設(shè)置文件，測(cè)量其它圖片時(shí)之間調(diào)用，以減小測(cè)量誤差。完成后點(diǎn)擊close。

9. 在count/size界面選擇Option，然后按照下圖進(jìn)行設(shè)置。最關(guān)鍵的是選擇filled。完成后點(diǎn)擊OK。

10. 點(diǎn)擊count，可以看到劃痕區(qū)域被選擇為多個(gè)測(cè)量區(qū)域，且存在一個(gè)最大測(cè)量區(qū)域被紅色全部充滿。這樣的測(cè)量才是符合的。

11. 點(diǎn)擊View，查看數(shù)據(jù)。其中最大面積及其對(duì)應(yīng)的高度值就是我們需要的數(shù)據(jù)。

12. 細(xì)胞劃痕寬度

（eg，本例中細(xì)胞劃痕最大的測(cè)量面積是1954623，對(duì)應(yīng)長(zhǎng)度為2531，那么細(xì)胞劃痕平均寬度就是772.3）

13. 測(cè)量單位的問(wèn)題

首先，你的所有圖片應(yīng)該是在同一倍數(shù)的鏡下拍攝，一般10X。此時(shí)你采用IPP測(cè)量的寬度數(shù)值單位是“像素”，如果是多組間的比較，是否有單位對(duì)于組間比較無(wú)影響。

至于這個(gè)像素所代表的實(shí)際尺寸，則必須在該顯微鏡10X倍數(shù)下重新拍攝一個(gè)標(biāo)尺，然后使用這個(gè)標(biāo)尺進(jìn)行像素與尺寸的換算，最終得到細(xì)胞劃寬度的實(shí)際尺寸。

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