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小鼠膜聯(lián)蛋白Ⅴelisa檢測試劑盒雙抗體夾心法

來源:上海谷研實(shí)業(yè)有限公司   2021年12月22日 15:26  

小鼠膜聯(lián)蛋白Ⅴelisa檢測試劑盒雙抗體夾心法:


  雙抗體夾心法是檢測抗原zui常用的方法,操作步驟如下:


  (1)將特異性抗體與固相載體連接,形成固相抗體:洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。


  (2)加受檢標(biāo)本:使之與固相抗體接觸反應(yīng)一段時(shí)間,讓標(biāo)本中的抗原與同相載體上的抗體結(jié)合,形成固相抗原復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合的物質(zhì)。


  (3)加酶標(biāo)抗體:使同相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。此時(shí)固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量正相關(guān)。


  (4)加底物:酶催化底物成為有色產(chǎn)物。根據(jù)顏色反應(yīng)的程度進(jìn)行該抗原的定性或定量。


  根據(jù)同樣原理,將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標(biāo)抗原結(jié)合物,即可雙抗原夾心法測定標(biāo)本中的抗體。


  (二)雙位點(diǎn)一步法:


  在雙抗體夾心法測定抗原時(shí),如應(yīng)用針對(duì)抗原分子上兩個(gè)不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標(biāo)抗體,則在測定時(shí)可使標(biāo)本的加入和酶標(biāo)抗體的加入兩步并作一步。這種雙位點(diǎn)一步法不但簡化了操作,


  縮短了反應(yīng)時(shí)間,如果使用高親和力的單克隆抗體,測定的敏感性和特異性也顯著提高。單克隆抗體的應(yīng)用使測定抗原的ELISA提高到新水平。

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