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血清熱滅活真的是在浪費(fèi)時間嗎?

來源:上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司   2021年12月24日 11:18  

血清的熱滅活是很多培養(yǎng)者感興趣的話題,價格不菲的血清中含有諸如生長因子,維生素,氨基酸等珍貴物質(zhì),而將它們置于50℃以上的溫度長達(dá)30分鐘是*沒有必要的。盡管如此,在大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室之中血清的熱滅活還是作為常規(guī)來執(zhí)行,多數(shù)實(shí)驗(yàn)者并沒有考慮熱處理對血清中的生長因子,氨基酸等成分帶來的負(fù)面影響,在我們的技術(shù)熱線中最常被提到的就是否該對血清進(jìn)行熱滅活,下面我們就對胎牛血清的熱滅活進(jìn)行一些探討和解釋。


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根據(jù)調(diào)查,至少70%的研究者對血清的滅活僅僅是因?yàn)樽裾粘R?guī)操作,或者說認(rèn)為是理所當(dāng)然的。常規(guī)滅活建議的溫度在45℃到62℃之間,而時間則從15分鐘到60分鐘不等.其中最chang用的手法是56℃熱處理30分鐘。隨著血清采集、處理、加工工藝的提高,許多早先認(rèn)為是熱滅活的原因已經(jīng)不再成立,只有少數(shù)對血清進(jìn)行熱滅活的研究者在實(shí)驗(yàn)中證實(shí)了這一步驟的有效性和必要性。

熱滅活目的是為了去除血清中補(bǔ)體等對熱敏感的物質(zhì),但是在胎牛血清中對補(bǔ)體的滅活則明顯沒有必要。有科研人員曾對商業(yè)胎牛血清中的補(bǔ)體成分進(jìn)行測定,他們發(fā)現(xiàn)胎牛血清中含有的C1,C6僅達(dá)成年動物血清的1-3%,而其它補(bǔ)體成分僅有成年動物的5-50%,至于補(bǔ)體的主要成分C3在胎牛血清中則幾乎不能檢出。通過補(bǔ)體固定實(shí)驗(yàn),我們也在多個不同批次的胎牛血清中獲得了相似的結(jié)果。即使是在未稀釋的血清中,也未發(fā)現(xiàn)有明顯的溶血現(xiàn)象。另外,多數(shù)實(shí)驗(yàn)室在培養(yǎng)前將培養(yǎng)液進(jìn)行預(yù)熱的過程,也對熱敏的補(bǔ)體有滅活的作用。

在對補(bǔ)體滅活以外,熱處理同時也對血清中可能存在的支原體具有滅活作用。多年以前,450納米孔徑的濾膜被用于加工血清時,血清中支原體的污染時有發(fā)生。針對這個問題,HyClone使用100納米三層濾膜連續(xù)濾過技術(shù),自從采用這項(xiàng)技術(shù)以及后來的40納米濾過技術(shù)之后,我們的血清產(chǎn)品中沒有再發(fā)現(xiàn)有支原體的污染,也是使得熱滅活成為不必要的另外一個原因。

Pinyopummintr等證明血清去除滅活步驟不影響牛胚胎的發(fā)育分化,有研究結(jié)果證實(shí)熱滅活步驟減弱了胎牛血清和小牛血清對細(xì)胞的促粘附作用,在用SV-BHK、BALB-3T3、CV-1、FS-4細(xì)胞對細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)中,熱滅活對胎牛血清的影響小于對小牛血清的影響。

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