原理
材料與儀器
人的MyoD1(MYF3)基因探針 人外周血中期染色體細(xì)胞標(biāo)本
指甲油 甲酰胺 氯化鈉 檸檬酸鈉 氫氧化鈉 吐溫20
恒溫水浴鍋 培養(yǎng)箱 染色缸 載玻片 Nikon E-400熒光顯微鏡 蓋玻片 封口膜 200μL移液器 暗盒
步驟
3. 雜交
注意事項(xiàng)
相關(guān)溶液的配制
1.20×SSC:175.3 g NaCl,88.2 g檸檬酸鈉,加水至1 000 mL(用10 mol/L NaOH調(diào)pH 至7.0)。
2.去離子甲酰胺(DF):將10 g混合床離子交換樹脂加入100 mL甲酰胺中。電磁攪拌30 min,用Whatman l號(hào)濾紙濾。
3.體積分?jǐn)?shù)70%甲酰胺/2×SSC:35 mL甲酰胺,5 mL 20×SSC,10 mL水。
4.體積分?jǐn)?shù)50%甲酰胺/2×SSC:100 mL甲酰胺,20 mL 20×SSC,80 mL水。
5.體積分?jǐn)?shù)50%硫酸葡聚糖(DS):65℃水浴中融化,4℃或-20℃保存。
6.雜交液:8 μL體積分?jǐn)?shù)25%DS,20 μL 20×SSC混合。(或40 μL體積分?jǐn)?shù)50% DS,20 μL 20×SSC,40 μL ddH2O混合)取上述混合液50 μL,與5 μL DF混合即成。其終濃度為體積分?jǐn)?shù)10% DS,2×SSC,體積分?jǐn)?shù)50% DF。
7.PI/antifade溶液
PI原液:先以雙蒸水配置溶液,濃度為100 μg/mL,取出1 mL,加39 mL雙蒸水,使終濃度為2.5 μg/mL。Antifade原液:以PBS緩沖液配制該溶液,使其濃度為10 mg/mL,用0.5 mmol/L的NaHCO3調(diào)pH值為8.0。取上述溶液1 mL,加9 mL甘油,混勻。
PI/antifade溶液:PI與antifade原液按體積比1:9比例充分混勻,——20℃保存?zhèn)溆谩?/p>
8.DAPI/antifade溶液:用去離子水配制1mL/mg DAPI儲(chǔ)存液,按體積比1:300,以antifade溶液稀釋成工作液。
9.封閉液I:體積分?jǐn)?shù)5% BSA 3 mL,20×SSC 1 mL,ddH2O 1mL,Tween20 5 μL混合。
10.封閉液II:體積分?jǐn)?shù)5% BSA 3mL,20×SSC 1mL,goat serum 250 μL,ddH2O 750 μL,Tween20 5 μL混合。
11.熒光檢測試劑稀釋液:體積分?jǐn)?shù)5% BSA 1mL,20×SSC 1mL,ddH2O 3mL,Tween20 5μL混合。
12.洗脫液:100 mL 20×SSC,加水至500 mL,加Tween20 500 μL。
常見問題
相關(guān)溶液的配制
1.20×SSC:175.3 g NaCl,88.2 g檸檬酸鈉,加水至1 000 mL(用10 mol/L NaOH調(diào)pH 至7.0)。
2.去離子甲酰胺(DF):將10 g混合床離子交換樹脂加入100 mL甲酰胺中。電磁攪拌30 min,用Whatman l號(hào)濾紙濾。
3.體積分?jǐn)?shù)70%甲酰胺/2×SSC:35 mL甲酰胺,5 mL 20×SSC,10 mL水。
4.體積分?jǐn)?shù)50%甲酰胺/2×SSC:100 mL甲酰胺,20 mL 20×SSC,80 mL水。
5.體積分?jǐn)?shù)50%硫酸葡聚糖(DS):65℃水浴中融化,4℃或-20℃保存。
6.雜交液:8 μL體積分?jǐn)?shù)25%DS,20 μL 20×SSC混合。(或40 μL體積分?jǐn)?shù)50% DS,20 μL 20×SSC,40 μL ddH2O混合)取上述混合液50 μL,與5 μL DF混合即成。其終濃度為體積分?jǐn)?shù)10% DS,2×SSC,體積分?jǐn)?shù)50% DF。
7.PI/antifade溶液
PI原液:先以雙蒸水配置溶液,濃度為100 μg/mL,取出1 mL,加39 mL雙蒸水,使終濃度為2.5 μg/mL。Antifade原液:以PBS緩沖液配制該溶液,使其濃度為10 mg/mL,用0.5 mmol/L的NaHCO3調(diào)pH值為8.0。取上述溶液1 mL,加9 mL甘油,混勻。
PI/antifade溶液:PI與antifade原液按體積比1:9比例充分混勻,——20℃保存?zhèn)溆谩?/p>
8.DAPI/antifade溶液:用去離子水配制1mL/mg DAPI儲(chǔ)存液,按體積比1:300,以antifade溶液稀釋成工作液。
9.封閉液I:體積分?jǐn)?shù)5% BSA 3 mL,20×SSC 1 mL,ddH2O 1mL,Tween20 5 μL混合。
10.封閉液II:體積分?jǐn)?shù)5% BSA 3mL,20×SSC 1mL,goat serum 250 μL,ddH2O 750 μL,Tween20 5 μL混合。
11.熒光檢測試劑稀釋液:體積分?jǐn)?shù)5% BSA 1mL,20×SSC 1mL,ddH2O 3mL,Tween20 5μL混合。
12.洗脫液:100 mL 20×SSC,加水至500 mL,加Tween20 500 μL。
熒光原位雜交(Fluorescence in situ hybridization FISH)是一門新興的分子細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù),是20世紀(jì)80年代末期在原有的放射性原位雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種非放射性原位雜交技術(shù)。目前這項(xiàng)技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于動(dòng)植物基因組結(jié)構(gòu)研究、染色體精細(xì)結(jié)構(gòu)變異分析、病毒感染分析、人類產(chǎn)前診斷、腫瘤遺傳學(xué)和基因組進(jìn)化研究待許多領(lǐng)域。
與傳統(tǒng)的放射性標(biāo)記原位雜交相比,熒光原位雜交具有快速、檢測信號(hào)強(qiáng)、雜交特異性高和可以多重染色等特點(diǎn),因此在分子細(xì)胞遺傳學(xué)領(lǐng)域受到普遍關(guān)注。
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安培生物堅(jiān)持為生命科學(xué)研究、活體動(dòng)物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細(xì)胞治療領(lǐng)域客戶,提供*細(xì)胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑;inviCELL™Platelet lysate無動(dòng)物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細(xì)胞擴(kuò)增和生產(chǎn),包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞系等,為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無血清細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù);提供以植物生物為平臺(tái)基因序列全人源化、*的細(xì)胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品;提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對(duì)細(xì)胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù),努力發(fā)展為基因治療、細(xì)胞治療的生物科技企業(yè)。
相關(guān)產(chǎn)品
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