材料與儀器

人的MyoD1（MYF3)基因探針 人外周血中期染色體細(xì)胞標(biāo)本
指甲油 甲酰胺 氯化鈉 檸檬酸鈉 氫氧化鈉 吐溫20
恒溫水浴鍋 培養(yǎng)箱 染色缸 載玻片 Nikon E-400熒光顯微鏡 蓋玻片 封口膜 200μL移液器 暗盒

步驟

注意事項(xiàng)

相關(guān)溶液的配制

1.20×SSC：175.3 g NaCl，88.2 g檸檬酸鈉，加水至1 000 mL（用10 mol/L NaOH調(diào)pH 至7.0）。

2.去離子甲酰胺（DF）：將10 g混合床離子交換樹脂加入100 mL甲酰胺中。電磁攪拌30 min，用Whatman l號濾紙濾。

3.體積分?jǐn)?shù)70%甲酰胺/2×SSC：35 mL甲酰胺，5 mL 20×SSC，10 mL水。

4.體積分?jǐn)?shù)50%甲酰胺/2×SSC：100 mL甲酰胺，20 mL 20×SSC，80 mL水。

5.體積分?jǐn)?shù)50%硫酸葡聚糖（DS）：65℃水浴中融化，4℃或-20℃保存。

6.雜交液：8 μL體積分?jǐn)?shù)25%DS，20 μL 20×SSC混合。（或40 μL體積分?jǐn)?shù)50% DS，20 μL 20×SSC，40 μL ddH2O混合）取上述混合液50 μL，與5 μL DF混合即成。其終濃度為體積分?jǐn)?shù)10% DS，2×SSC，體積分?jǐn)?shù)50% DF。

7.PI/antifade溶液

PI原液：先以雙蒸水配置溶液，濃度為100 μg/mL，取出1 mL，加39 mL雙蒸水，使終濃度為2.5 μg/mL。Antifade原液：以PBS緩沖液配制該溶液，使其濃度為10 mg/mL，用0.5 mmol/L的NaHCO3調(diào)pH值為8.0。取上述溶液1 mL，加9 mL甘油，混勻。

PI/antifade溶液：PI與antifade原液按體積比1:9比例充分混勻，——20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

8.DAPI/antifade溶液：用去離子水配制1mL/mg DAPI儲(chǔ)存液，按體積比1:300，以antifade溶液稀釋成工作液。

9.封閉液I：體積分?jǐn)?shù)5% BSA 3 mL，20×SSC 1 mL，ddH2O 1mL，Tween20 5 μL混合。

10.封閉液II：體積分?jǐn)?shù)5%  BSA 3mL，20×SSC 1mL，goat serum 250 μL，ddH2O 750 μL，Tween20 5 μL混合。

11.熒光檢測試劑稀釋液：體積分?jǐn)?shù)5%  BSA 1mL，20×SSC 1mL，ddH2O 3mL，Tween20 5μL混合。

12.洗脫液：100 mL 20×SSC，加水至500 mL，加Tween20 500 μL。

常見問題

相關(guān)溶液的配制

1.20×SSC：175.3 g NaCl，88.2 g檸檬酸鈉，加水至1 000 mL（用10 mol/L NaOH調(diào)pH 至7.0）。

2.去離子甲酰胺（DF）：將10 g混合床離子交換樹脂加入100 mL甲酰胺中。電磁攪拌30 min，用Whatman l號濾紙濾。

3.體積分?jǐn)?shù)70%甲酰胺/2×SSC：35 mL甲酰胺，5 mL 20×SSC，10 mL水。

4.體積分?jǐn)?shù)50%甲酰胺/2×SSC：100 mL甲酰胺，20 mL 20×SSC，80 mL水。

5.體積分?jǐn)?shù)50%硫酸葡聚糖（DS）：65℃水浴中融化，4℃或-20℃保存。

6.雜交液：8 μL體積分?jǐn)?shù)25%DS，20 μL 20×SSC混合。（或40 μL體積分?jǐn)?shù)50% DS，20 μL 20×SSC，40 μL ddH2O混合）取上述混合液50 μL，與5 μL DF混合即成。其終濃度為體積分?jǐn)?shù)10% DS，2×SSC，體積分?jǐn)?shù)50% DF。

7.PI/antifade溶液

PI原液：先以雙蒸水配置溶液，濃度為100 μg/mL，取出1 mL，加39 mL雙蒸水，使終濃度為2.5 μg/mL。Antifade原液：以PBS緩沖液配制該溶液，使其濃度為10 mg/mL，用0.5 mmol/L的NaHCO3調(diào)pH值為8.0。取上述溶液1 mL，加9 mL甘油，混勻。

PI/antifade溶液：PI與antifade原液按體積比1:9比例充分混勻，——20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

8.DAPI/antifade溶液：用去離子水配制1mL/mg DAPI儲(chǔ)存液，按體積比1:300，以antifade溶液稀釋成工作液。

9.封閉液I：體積分?jǐn)?shù)5% BSA 3 mL，20×SSC 1 mL，ddH2O 1mL，Tween20 5 μL混合。

10.封閉液II：體積分?jǐn)?shù)5%  BSA 3mL，20×SSC 1mL，goat serum 250 μL，ddH2O 750 μL，Tween20 5 μL混合。

11.熒光檢測試劑稀釋液：體積分?jǐn)?shù)5%  BSA 1mL，20×SSC 1mL，ddH2O 3mL，Tween20 5μL混合。

12.洗脫液：100 mL 20×SSC，加水至500 mL，加Tween20 500 μL。

熒光原位雜交（Fluorescence in situ hybridization FISH）是一門新興的分子細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)，是20世紀(jì)80年代末期在原有的放射性原位雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種非放射性原位雜交技術(shù)。目前這項(xiàng)技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于動(dòng)植物基因組結(jié)構(gòu)研究、染色體精細(xì)結(jié)構(gòu)變異分析、病毒感染分析、人類產(chǎn)前診斷、腫瘤遺傳學(xué)和基因組進(jìn)化研究待許多領(lǐng)域。

與傳統(tǒng)的放射性標(biāo)記原位雜交相比，熒光原位雜交具有快速、檢測信號強(qiáng)、雜交特異性高和可以多重染色等特點(diǎn)，因此在分子細(xì)胞遺傳學(xué)領(lǐng)域受到普遍關(guān)注。

以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊，歡迎點(diǎn)擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。

安培生物科技有限公司介紹：

安培生物堅(jiān)持為生命科學(xué)研究、活體動(dòng)物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細(xì)胞治療領(lǐng)域客戶，提供*細(xì)胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑；inviCELL™Platelet lysate無動(dòng)物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細(xì)胞擴(kuò)增和生產(chǎn)，包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞系等，為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無血清細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù)；提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細(xì)胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品；提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對細(xì)胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)，努力發(fā)展為基因治療、細(xì)胞治療的生物科技企業(yè)。