蛋白質(zhì)裂解液的選擇,除了要根據(jù)其“產(chǎn)量”,還要看所選擇的一抗是否能識(shí)別經(jīng)變性的蛋白質(zhì)樣品。一般來(lái)說(shuō)對(duì)于不能識(shí)別變性的蛋白質(zhì)樣品的一抗,其蛋白質(zhì)裂解液都會(huì)是不含去污劑或含有較溫和的非離子去污劑的(如:NP-40,Triton X-100)。
蛋白質(zhì)裂解液的配方有很多種,如何選擇合適的蛋白質(zhì)裂解液是做好免疫印跡的第一步。一些含有SDS(十二烷基硫酸鈉)和強(qiáng)離子去污劑(如:脫氧膽酸鈉)的蛋白質(zhì)裂解液能從組織或細(xì)胞中提取出大量的蛋白質(zhì),然而它們卻很容易會(huì)使蛋白質(zhì)變性。這樣,對(duì)于一些只能識(shí)別非變性的抗原表位的抗體來(lái)說(shuō),那些能使蛋白質(zhì)變性的含SDS和強(qiáng)離子去污劑的蛋白質(zhì)裂解液就不能被選擇。
蛋白質(zhì)的定位與蛋白質(zhì)裂解液的選擇:
全細(xì)胞:NP-40或RIPA
細(xì)胞質(zhì)(可溶):Tris-HCl
細(xì)胞質(zhì)(細(xì)胞骨架):Tris-Triton
細(xì)胞膜:NP-40或RIPA
細(xì)胞核:RIPA
線粒體:RIPA
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