細(xì)胞傳代培養(yǎng)小技巧

來源：蒂科（上海）生物科技有限公司 2022年01月17日 10:58

1.細(xì)胞生長至高密度時，即須分至新的培養(yǎng)瓶中，一般稀釋比例為1:3至1:6，依細(xì)胞種類而異。

2.材料：

2.1.胰酶溶液(0.05%胰酶)：以10ml分裝于15ml無菌離心管中，保存于?20℃，使用前放在37℃ 水槽回溫。2.3.新鮮培養(yǎng)基2.4.無菌吸管/離心管/培養(yǎng)瓶生

3.步驟：

3.1.附著型細(xì)胞(adherentcell)

3.1.1.吸掉舊培養(yǎng)液。

3.1.2.用D-PBS洗滌細(xì)胞一至二次。

3.1.3.加入胰酶溶液(1ml/25cm2,2ml/75cm2)，37℃作用數(shù)分鐘，于倒立顯微鏡下觀察，當(dāng)細(xì)胞將要分離而呈現(xiàn)圓粒狀時，吸掉或者傾倒胰酶溶液。(若沒有*去除，則在胰酶作用后，加入適量含血清之新鮮培養(yǎng)基終止胰酶作用)

3.1.4.輕拍培養(yǎng)瓶使細(xì)胞自瓶壁脫落，加入適量之新鮮培養(yǎng)基，以吸管上下吸放數(shù)次以打散細(xì)胞團(tuán)塊，混和均勻后，依稀釋比例轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中，以正常培養(yǎng)條件培養(yǎng)。

3.2.懸浮型細(xì)胞(suspensioncell)

3.2.1.吸出細(xì)胞培養(yǎng)液，放入離心管中，離心1000rpm5-10分鐘。

3.2.2.吸掉上清液，加入適量之新鮮培養(yǎng)基，混和均勻后，依稀釋比例轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中，以正常培養(yǎng)條件培養(yǎng)。

3.3.雜交瘤細(xì)胞

有些雜交瘤需培養(yǎng)三天以上才會產(chǎn)生抗體，若是更換培養(yǎng)基，則可能會失去抗體。因此繼代培養(yǎng)不需離心后更換培養(yǎng)基，直接添加新鮮培養(yǎng)基稀釋細(xì)胞濃度即可。若體積太大，可傾斜放置，或分至新培養(yǎng)瓶中。

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