方法一:先把質(zhì)粒整合到染色體上后,用相應(yīng)的質(zhì)粒DNA中的抗性標(biāo)志來篩選該細(xì)胞系,單克隆篩選穩(wěn)定細(xì)胞株。
第一步:篩選濃度測(cè)定,以10~14 天細(xì)胞全部死亡的抗生素濃度為篩選濃度;
第二步:進(jìn)行細(xì)胞接種,轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)前天接種細(xì)胞,各種細(xì)胞的平板密度依據(jù)各種細(xì)胞的生長(zhǎng)率和細(xì)胞形狀而定。進(jìn)行轉(zhuǎn)染當(dāng)天細(xì)胞密度應(yīng)達(dá)到60%~80% 覆蓋;
第三步:進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染
第四步:利用質(zhì)粒上含有的抗性選擇進(jìn)行篩選,并鑒定篩選結(jié)果。
方法二:應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄病毒,慢病毒轉(zhuǎn)染,篩選穩(wěn)定細(xì)胞株。慢病毒可以攜帶外源基因隨機(jī)整合進(jìn)基因組。轉(zhuǎn)染得到穩(wěn)定細(xì)胞株的效率高,是建立穩(wěn)定株的*方式。
第一步:將人源化的抗體基因轉(zhuǎn)接到慢病毒載體上,
第二步:使用包裝細(xì)胞,一般為293細(xì)胞,包裝出病毒,不同類型病毒包裝時(shí)間一般在3-5天。
第三步:用病毒轉(zhuǎn)染目的細(xì)胞。包裝好的病毒要先測(cè)滴度,根據(jù)滴度決定轉(zhuǎn)染目的細(xì)胞的病毒量。
第四步:后期篩選。轉(zhuǎn)染目的細(xì)胞1-2天后加抗生素篩選得到穩(wěn)定細(xì)胞株。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé),不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí),必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題,請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。