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在細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)倉鼠腎細胞的具體步驟
在培養(yǎng)各種細胞時，細胞培養(yǎng)瓶是使用頻率比較高的一種細胞培養(yǎng)耗材，它多用于貼壁細胞的培養(yǎng)，規(guī)格從25ml-225ml不等。倉鼠腎細胞培養(yǎng)液會選用這種耗材，其培養(yǎng)的具體步驟如下：
T75細胞培養(yǎng)瓶
1、細胞培養(yǎng)前期準備工作：
1）準備MEM培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗1%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
T225細胞培養(yǎng)瓶
2、細胞處理：
1）凍存細胞的復(fù)蘇：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL*培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，*培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml*培養(yǎng)基的細胞培養(yǎng)瓶中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
三角細胞搖瓶
3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。
以上是在細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)倉鼠腎細胞的具體步驟。此外，細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細胞/ml。
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