細(xì)胞凍存操作步驟：

1、預(yù)先配制凍存液：

     凍存液比例多種，根據(jù)細(xì)胞的特性進(jìn)行調(diào)整凍存液的比例：

     5%—10%DMSO  +  20%—90%血清  +  0%—70%基礎(chǔ)培養(yǎng)液；

2、取對數(shù)生長期的細(xì)胞，去除舊培養(yǎng)液，用PBS清洗1-2次；去掉培養(yǎng)瓶里的殘余血清；

3、加入適量胰酶（濃度一般為0.25%），使胰酶覆蓋整個瓶，放入培養(yǎng)箱消化；

4、細(xì)胞消化0.5-2min（具體時間根據(jù)鏡下形態(tài)判斷），顯微鏡下觀察細(xì)胞，細(xì)胞胞質(zhì)回縮，細(xì)胞間不再連接成片，此時        加入*培養(yǎng)基終止消化；

5、用巴氏吸管輕輕吹打細(xì)胞，形成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液1000r/min左右條件下離心3-5min；

6、棄上清，加入適量預(yù)先配制好的凍存液，巴氏吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻，計(jì)數(shù)，調(diào)節(jié)凍存液中的細(xì)胞最終密度為                5×106/ml～1×107/ml；

7、將細(xì)胞分裝入凍存管中，每管1-1.5ml；

8、凍存管標(biāo)記細(xì)胞名稱，凍存時間，操作者及細(xì)胞代數(shù)信息。

     對于懸浮細(xì)胞凍存，則直接收集離心細(xì)胞，除去胰酶消化的步驟，其他步驟相同。