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遠(yuǎn)慕技術(shù):質(zhì)粒純度不高怎么辦?

來源:上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司   2022年03月21日 11:48  

1.混有蛋白:不要使用過多菌體。經(jīng)溶液P1、P2、P3處理,離心后溶液應(yīng)為澄清的,如果還混有微小蛋白懸浮物可再次離心去除后再進行下一步驟。

2. 混有RNA:RNaseA處理不*,請減少菌體用量或加入溶液P3之后室溫放置一段時間。如果溶液P1已保存6個月以上,請在溶液P1中添加RNaseA。

3. 混有基因組DNA:加入溶液P2和P3后應(yīng)溫和混勻,如果劇烈振蕩,可能把基因組DNA剪切成碎片從而混雜在質(zhì)粒中。如果加入溶液P2后過于粘稠,無法溫和混勻,請減少菌體用量。細(xì)菌培養(yǎng)時間過長會導(dǎo)致細(xì)胞和DNA的降解,培養(yǎng)時間不要超過16小時。

4. P3溶液加入時間過長:P3溶液加入后,放置時間不要太長,否則有可能會產(chǎn)生小片段DNA污染。

5. 含大量核酸酶的宿主菌:宿主菌含大量核酸酶,在質(zhì)粒提取過程中降解質(zhì)粒DNA,影響提取質(zhì)粒DNA的完整性,最好選用不含核酸酶的大腸桿菌宿主菌,如DH5α和Top/10。

6. 質(zhì)粒的二聚體和多聚體形式:質(zhì)粒復(fù)制過程中形成的,與宿主菌相關(guān),電泳可檢測出多條條帶,單酶切處理后可變成單一條帶。

處理提示:

1、購買后,請務(wù)必確認(rèn)標(biāo)簽上的注意事項。

2、做好預(yù)防顛倒,摔壞的措施和管理體制。

3、在使用前再次確認(rèn)標(biāo)簽上的注意事項。做好必要的安全對策。

4、對沒有標(biāo)明其危險特性,有害特性的,也要慎重地進行操作。

5、必須戴好防護用具,小心翼翼進行操作。

6、請參照相關(guān)法規(guī),文獻(xiàn),MSDS等信息,理解并掌握好試劑的特性,再進行安全操作。

7、通常購買試劑時要想到一次性用完。若估算不足有剩余的話,要更加注意其保管和管理。

8、萬一試劑操作者并非專業(yè)技術(shù)人員。必須在專業(yè)人士的指導(dǎo)監(jiān)督下進行操作。

9、對于使用后的廢棄物,不要或舊的試劑,應(yīng)按照相關(guān)法律法規(guī)正當(dāng)處理。

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