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SRM972a標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)的應(yīng)用—維生素-D及25-羥基維生素-D測(cè)定

來源:東莞市百順生物科技有限公司   2022年03月23日 11:36  


功能性的維生素-D主要包括維生素-D3和維生素-D2。維生素-D 除了具有傳統(tǒng)意義上的骨骼效應(yīng),它還有著廣泛的非骨骼效應(yīng),與心血管疾病、免疫疾病、糖尿病、腫瘤等疾病密切相關(guān)。25-羥基維生素-D(25OHD)測(cè)定是衡量維生素-D 營養(yǎng)狀態(tài)的最佳指標(biāo)。根據(jù)測(cè)定原理不同,目前 25OHD 的測(cè)定方法可分為多種,液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)具有特異性強(qiáng)、準(zhǔn)確性高的特點(diǎn),被認(rèn)為是評(píng)價(jià)維生素-D 營養(yǎng)狀況的“金標(biāo)準(zhǔn)”測(cè)定法,美國NIST的SRM972a標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)用于測(cè)定的校準(zhǔn)品。

 

通過測(cè)定 25OHD 濃度來評(píng)價(jià)維生素-D 水平,現(xiàn)有多種方法用于臨床 25OHD的測(cè)定,根據(jù)方法原理,可分為酶免疫分析法和色譜法。由于所有的維生素-D羥化物都可能發(fā)生抗體抗原結(jié)合反應(yīng),因此酶免疫分析法只能測(cè)定 25OHD 總量,無法同時(shí)測(cè)定 25OHD2和 25OHD3的濃度。現(xiàn)有 25OHD 的色譜分析方法包括高效液相色譜法(HPLC)和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)。由于可分離并檢測(cè)不同的分析物,色譜法可區(qū)分并能分別定量 25OHD2和 25OHD3。

 

色譜法可將 25OHD2、25OHD3與維生素-D其他代謝物實(shí)現(xiàn)有效分離,提高檢測(cè)特異性。HPLC 是早期應(yīng)用較多的色譜法之一,可同時(shí)檢測(cè) 25OHD2和 25OHD3,具有良好的精密度,與 LC-MS/MS 法結(jié)果一致性較好。與免疫法相比,HPLC的相對(duì)不確定度小,分析成本更低,甚至還有 HPLC 商業(yè)試劑盒用于 25OHD的測(cè)定。但是 HPLC 的不足之處是分析時(shí)間長、檢測(cè)通量小、靈敏度低、所需樣品量大,不適合臨床應(yīng)用,已經(jīng)*被 LC-MS/MS 所替代。

 

LC-MS/MS 是色譜法中最為常用的 25OHD 檢測(cè)方法,樣品經(jīng)處理后采用液相色譜分離,檢測(cè)器為串聯(lián)質(zhì)譜儀,在多反應(yīng)監(jiān)測(cè)掃描模式下,實(shí)現(xiàn)分子離子和碎片離子兩次質(zhì)量選擇,可同時(shí)檢測(cè) 25OHD2和 25OHD3,具有非常高的檢測(cè)特異性,被認(rèn)為是“金標(biāo)準(zhǔn)”的檢測(cè)技術(shù)。LC-MS/MS 更加契合現(xiàn)代臨床實(shí)驗(yàn)室的工作流程,可*臨床檢測(cè)方法準(zhǔn)確性、特異性、檢測(cè)通量的要求。25OHD 的 LC-MS/MS檢測(cè)方法都是實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部開發(fā)的,不同的實(shí)驗(yàn)室采用不同的標(biāo)準(zhǔn)品來源、貯備液配制、樣品處理方法等,影響了室間可比性。


而采用共同的校準(zhǔn)品、參加英國維生素-D 代謝物室間質(zhì)評(píng)計(jì)劃(DEQAS)、美國病理學(xué)家協(xié)會(huì)(CAP)的能力測(cè)試等措施有助于改進(jìn)方法間、實(shí)驗(yàn)室間測(cè)定結(jié)果的可比性:美國標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)研究(NIST)所提供血清 25OHD2和 25OHD3的SRM972a標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì),采用 LCMS/MS 測(cè)定靶值。2009 年 DEQAS 有 35 國家、670 家實(shí)驗(yàn)室參加,目前我國尚無相應(yīng)的 25OHD 的室間質(zhì)評(píng)計(jì)劃。

 

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