捻轉毛細線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒實驗操作:

1. 模板制備（樣本制備區(qū)）

建議使用配套水生動物病害基因組 DNA/RNA 提取試劑盒系列產(chǎn)品，具體過程詳見產(chǎn)品說明書。

2．添加模板（模板添加區(qū)，放置于冰盒中進行）

請于-20℃條件下保存，有效期 12 個月

取出所需測試數(shù)的已含有反應液 A-TSV-I 的 PCR 管，將試劑*解凍，離心 30 秒，在管蓋上標記管名（陰性對照管 NG、樣品 XX、陽性對照管 PG）。打開管蓋向各管管底分別加入 0.8μL B-I 及 0.2μL R-I，蓋上陰性對照管管蓋，其他各管分別沿管壁加入 2μL 模板，順序為待測樣品模板、PG-TSV-I，依次蓋好各管管蓋，離心 30 秒，立即進行擴增反應。

3. 擴增反應（擴增及產(chǎn)物分析區(qū)）

①恒溫儀器 63℃條件下反應 60 min。待儀器升溫至 63℃后，新建程序，設置實驗名稱及反應時間，將步驟 2中離心后的 PCR 反應管放入恒溫熒光分子檢測儀，點擊開始檢測。

②若使用熒光定量 PCR 儀，則熒光基團選擇 FAM，淬滅基團選擇 None，將 63℃ 15 s，63℃ 45 s 作為一個循環(huán)，于 63℃ 45 s 處收集熒光信號，60 個循環(huán)。

其他儀器請參照儀器說明書進行設置。

設置qPCR反應（20 μL體系，在樣品制備室進行）

10. 如果只做1次重復，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復，則反應設置數(shù)量相應增加2或3倍。

11. 在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加）：

人烏頭酸酶1(ACO1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Human ACO1 (Aconitase 1) ELISA Kit

人羧肽酶E(CPE)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Human CPE (Carboxypeptidase E) ELISA Kit 

人抗神經(jīng)節(jié)苷脂M1抗體(Anti-GM1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human Anti-GM1 (Anti-Ganglioside M1 Antibody) ELISA Kit

人絨毛膜促性腺激素α肽(CGα)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Human CGα (Chorionic Gonadotropin Alpha Polypeptide) ELISA Kit

人血管緊張素III(Ang-III)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human Ang-III (Angiotensin III) ELISA Kit

人精氨酰tRNA合成酶(RARS)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Human RARS (Arginyl tRNA Synthetase, cytoplasmic) ELISA Kit

人成纖維細胞生長因子受體3(FGFR3)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human FGFR3 (Fibroblast Growth Factor Receptor 3) ELISA Kit 

人成纖維細胞生長因子受體4(FGFR4)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human FGFR4 (Fibroblast Growth Factor Receptor 4) ELISA Kit 

人二肽基肽酶X (DPP10)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human DPP10 (Dipeptidyl Peptidase X) ELISA Kit

人細胞色素P450氧化還原酶(CPR)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human CPR (Cytochrome P450 Reductase) ELISA Kit 

人細胞因子受體樣因子1(CRLF1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Human CRLF1 (Cytokine Receptor Like Factor 1) ELISA Kit

人集落刺激因子2受體β (CSF2Rβ)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Human CSF2Rβ (Colony Stimulating Factor 2 Receptor Beta) ELISA Kit 

人碳酸酐酶III(CA3)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Human CA3 (Carbonic Anhydrase III, Muscle Specific) ELISA Kit

人抗胰島素受體抗體(AIRA)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒  Human AIRA (Anti-Insulin Receptor Antibody) ELISA Kit

人細胞色素P450家族成員1A1(CYP1A1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human CYP1A1 (Cytochrome P450, family 1, subfamily A, polypeptide 1) ELISA Kit