胎牛血清是實(shí)驗(yàn)室常用的天然培養(yǎng)基,但不能直接使用。無論是存儲(chǔ)還是使用,都比較復(fù)雜。血清的常規(guī)處理是熱鈍化,即置于56°水浴中30分鐘;其目的是使血清中的補(bǔ)體成分和一些未知的細(xì)胞生長抑制分子失活。
實(shí)驗(yàn)表明,大多數(shù)細(xì)胞不需要經(jīng)過正確處理后的熱滅活血清。經(jīng)過這樣的處理,血清只能輕微促進(jìn)細(xì)胞的生長,或者根本沒有作用。即使是高溫處理通常也會(huì)影響血清的質(zhì)量并降低細(xì)胞的生長速度。熱處理過的血清會(huì)顯著增加沉淀物的形成。在倒置顯微鏡下觀察時(shí),這些沉淀物,如“小黑點(diǎn)”,常常使研究人員誤認(rèn)為血清被污染了,而將血清置于37℃的環(huán)境中會(huì)增加這種沉淀物,使研究人員誤認(rèn)為是它是微生物的分裂和擴(kuò)張。如果沒有必要,可以不需要熱處理。不僅節(jié)省時(shí)間,還保證了精華液的質(zhì)量!
透析治療可以從胎牛血清中去除所有分子量小于10000DA的分子。例如,可以去除激素、細(xì)胞因子、葡萄糖、氨基酸和許多其他分子。透析還可以從血清中去除抗生素和其他內(nèi)源性分子。
胎牛血清的常規(guī)滅菌方法是多次通過0.1um濾膜以消除微生物污染,而伽馬射線照射可以滅活牛體內(nèi)常見的病毒。但是,某些類型的病毒可以抵抗伽馬輻射,例如細(xì)小病毒。
需要注意的是,血清一般在-5°到-20°之間冷凍,在2°到8°之間融化。更好的方法是將血清分裝到50ml的試管中,避免反復(fù)凍融對(duì)血清造成的傷害。血清融化后常出現(xiàn)沉淀,可能是血清蛋白變性所致。沉淀物可以通過短暫的離心去除,這些沉淀物一般不會(huì)影響血清的質(zhì)量。
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