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單細(xì)胞鋪板在鋪細(xì)胞時(shí)要注意手法

來(lái)源:Bio-Techne   2022年04月20日 13:42  
       單細(xì)胞鋪板是細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中最常見又必須掌握的一門技術(shù),看似簡(jiǎn)單,我們卻經(jīng)常遇到:如細(xì)胞居中或者中間稀疏等不均勻分布的現(xiàn)象,導(dǎo)致我們只能扔掉,重新鋪板。既耽擱時(shí)間又浪費(fèi)了細(xì)胞及培養(yǎng)板等資源。
  單細(xì)胞鋪板要鋪成那種很均勻的單層細(xì)胞,手法如下:
  1、細(xì)胞板子先加入一定量(一般是總量培養(yǎng)基的1/5)的培養(yǎng)基,放入孵箱中放置10-20min;
  2、在滴入細(xì)胞時(shí),細(xì)胞板子與通風(fēng)櫥有一定的角度,沿著板壁的孔邊緣滴入;
  3、滴入后,呈“8”字方法搖晃5-8次;4、置于水平臺(tái)上,放置10-20分鐘;5、放入孵箱。
  其實(shí)單細(xì)胞鋪板不一定都需要單個(gè)單個(gè)的那么均勻,比如做免疫熒光時(shí),因?yàn)檫@個(gè)樣子可以同時(shí)檢測(cè)到單個(gè)細(xì)胞的形態(tài),另外又可以照一點(diǎn)低倍的用作于統(tǒng)計(jì),所有的細(xì)胞都在一個(gè)環(huán)境中。特別說(shuō)明一下:這里的多也只是相對(duì)于多,細(xì)胞也是單層的。
  鋪細(xì)胞時(shí)要注意手法如下:
  1、細(xì)胞板子不需要提前用培養(yǎng)基潤(rùn)洗,直接從邊上滴入混有細(xì)胞的培養(yǎng)基;
  2、放置30s-1min后,前后搖晃5-8次;
  3、放在水平臺(tái)上靜置2-5min;
  4、放入孵箱。
  一般在提取蛋白或者提取RNA的時(shí)候有時(shí)會(huì)這樣鋪板,因?yàn)橛行┘?xì)胞刮刀不好用,沒(méi)有辦法刮到周圍的,想要鋪中間多,周圍少的板子,手法如下:
  1、細(xì)胞板子不需要提前潤(rùn)洗,從中間滴入進(jìn)去后;
  2、把板子朝一個(gè)方向順時(shí)針或者逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)3-5圈;
  3、水平臺(tái)上靜置2-5min;
  4、放入孵箱。

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