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拉曼光譜儀的校準(zhǔn)與相關(guān)方法驗證
拉曼光譜儀的校準(zhǔn)包括三個要素：初始波長（X軸）、激光波長以及強度（Y軸）。儀器廠家應(yīng)提供一種由用戶可以執(zhí)行的，對儀器相關(guān)參數(shù)校準(zhǔn)的方法，除另有規(guī)定外，使用者應(yīng)根據(jù)儀器所提供的校準(zhǔn)方法制定具體的SOP，并嚴(yán)格按照SOP對上述參數(shù)進(jìn)行驗證。
特別需要注意，激光波長變化可影響儀器的波長精度和光度（強度）精度。即使是穩(wěn)定的激光器在使用過程中，其輸出波長也會有輕微變化。所以，激光波長必須被校正以確保拉曼位移的準(zhǔn)確性?？梢允褂脙x器廠家提供的拉曼位移標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)進(jìn)行定期校正。某些儀器可以用一種拉曼內(nèi)標(biāo)物與初級光路分離，外在校準(zhǔn)裝置通過散射輻射準(zhǔn)確地重現(xiàn)這一光路。推薦大家使用外部參考標(biāo)準(zhǔn)對拉曼光譜儀進(jìn)行校正。
拉曼光譜儀的相關(guān)方法驗證：
對拉曼方法進(jìn)行驗證是必須的，至少應(yīng)考察準(zhǔn)確度、精密度等主要指標(biāo)，然而這些指標(biāo)受諸多可變因素的影響，其中熒光可能是影響方法適用性的主要變量。樣品中熒光雜質(zhì)的存在*隨樣品而異。所以方法必須能適應(yīng)不同樣品體系，必須足以將雜質(zhì)的影響降到最小。
檢測器的線性必須適應(yīng)可能的信號水平范圍。熒光可能使信號基線比驗證時高，這時必須設(shè)法將熒光減弱或者使驗證的方法適應(yīng)較高的熒光水平。這一要求對方法的精密度，檢測限（LOD）和定量限（LOQ）同樣適用，因為基線噪聲的增加會對這些數(shù)值產(chǎn)生影響。
由于熒光使基線漂移可能同樣會影響定量，所以使用時同樣需要在不同的光漂白作用水平進(jìn)行可接受的定量驗證。
確定激光是否對樣品造成影響。在不同激光功率和暴露時間的條件下，對樣品目視檢查和仔細(xì)審視測得的拉曼光譜測量可以確定樣品是否改變（而不是光漂白作用）。觀察到依據(jù)是譜帶的位置、峰強和譜帶寬度是否改變或者背景強度是否有明顯的變化。
影響方法精密度的因素包括樣品的位置。樣品的形態(tài)對于固體或液體都是非常重要的因素，在校正模型中必須嚴(yán)密控制或說明。樣品的制備方法或樣品試架的形狀可能影響測量靈敏度，而且該靈敏度會隨著儀器的激發(fā)光和采集光學(xué)設(shè)置的不同而不同。
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