豬肉中四環(huán)素類、磺胺類和喹諾酮類藥物多殘留量的測定

 

四環(huán)素類藥物 (TCs)、磺胺類藥物 (SAs)和喹諾酮類藥物 (QNs)是畜牧養(yǎng)殖中常用到的三類藥物，常用來治療或預(yù)防雞的細(xì)菌、支原體和球蟲感染，但若使用不當(dāng)會(huì)導(dǎo)致其在動(dòng)物源性食品中的殘留超標(biāo), 影響人類健康, 并且會(huì)使細(xì)菌的耐藥性增強(qiáng)。

2022年2月1日，GB 31658.17-2021《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 動(dòng)物性食品中四環(huán)素類、磺胺類和喹諾酮類多殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》正式實(shí)施，本文參考上述標(biāo)準(zhǔn)，試樣中殘留的四環(huán)素類、磺胺類和喹諾酮類藥物，用Mcllvaine-Na2EDTA緩沖液提取，使用HLB柱經(jīng)?？艶otector Plus全自動(dòng)固相萃取儀凈化，洗脫液經(jīng)?？?EVA 80全自動(dòng)氮吹儀濃縮，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定，外標(biāo)法定量。

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儀器和耗材

● 儀器

Fotector Plus全自動(dòng)固相萃取儀

EVA 80 高通量全自動(dòng)平行濃縮儀

Agilent 1290Ⅱ/6470高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀

 

Fotector Plus

全自動(dòng)固相萃取儀

 

EVA 80 高通量

全自動(dòng)平行濃縮儀

● 耗材

HLB固相萃取柱（RayCure，200 mg/6 mL）

● 試劑

甲醇（優(yōu)級(jí)純）

乙腈（優(yōu)級(jí)純）

正己烷（優(yōu)級(jí)純）

超純水

0.05 mol/L 磷酸二氫鈉溶液：取磷酸二氫鈉7.8 g，用水溶解并稀釋至1000 mL。

0.05 mol/L 磷酸氫二鈉溶液：取磷酸氫二鈉17.9 g，用水溶解并稀釋至1000 mL。

磷酸鹽緩沖液：取0.05 mol/L磷酸二氫鈉溶液190 mL，用0.05 mol/L磷酸氫二鈉溶液稀釋至1000 mL。

1 mol/L氫氧化鈉溶液：取氫氧化鈉4 g，用水溶解并稀釋至100 mL。

0.03 mol/L氫氧化鈉溶液：取1 mol/L氫氧化鈉溶液3 mL，用水稀釋至100 mL。

Mcllvaine-Na2EDTA緩沖液：取檸檬酸12.9 g、磷酸氫二鈉10.9 g、乙二胺四乙酸二鈉39.2 g，加水900 mL，用1 mol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至5.0±0.2，用水稀釋至1000 mL。

洗脫液：取甲醇150 mL，加乙酸乙酯150 mL、濃氨水6 mL，混勻。

復(fù)溶液：取水40 mL，加甲醇5 mL、乙腈5 mL、甲酸0.05 mL，混勻。

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樣品制備

取試樣1 g（準(zhǔn)確至±0.01 g）于50 mL離心管，加入Mcllvaine-Na2EDTA緩沖液8 mL，渦旋1 min,超聲20 min，高速冷凍離心5 min，收集上清液。下層殘?jiān)屑恿姿猁}緩沖液8 mL，重復(fù)提取一次，合并兩次提取液，混勻，備用。

● 凈化

將HLB固相萃取柱安裝在Fotector Plus全自動(dòng)固相萃取儀上，依次用甲醇5 mL、水5 mL活化，取備用液過柱，依次用5 mL水和20%甲醇水溶液5 mL淋洗，吹干，用洗脫液10 mL洗脫。收集洗脫液于EVA-80全自動(dòng)平行濃縮儀中45 ℃水浴氮?dú)獯蹈?。加入?fù)溶液1.0 mL，渦旋1 min溶解殘余物，微孔濾膜過濾，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定。

具體的固相萃取方法見圖3。

●固相萃取凈化條件

 

 

Fotector Plus固相萃取方法

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液質(zhì)檢測條件

● 液相條件

 

● 液相梯度洗脫條件

 

● 質(zhì)樸儀器參數(shù)

 

● MRM參數(shù)

 

● 色譜圖

 

四環(huán)素類、磺胺類和喹諾酮類藥物標(biāo)準(zhǔn)溶液總離子流圖（20μg/L）

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結(jié)果與討論

為了驗(yàn)證該方法的回收率，本實(shí)驗(yàn)在空白豬肉樣品中加入四環(huán)素類、喹諾酮類和磺胺類標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行加標(biāo)回收驗(yàn)證(n=3)，并采用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線定量，數(shù)據(jù)結(jié)果如表-2所示。加標(biāo)回收率在62.4%~105.6%之間，RSD值控制在15%以內(nèi)，滿足標(biāo)準(zhǔn)要求，說明該方法能夠很好地運(yùn)用于動(dòng)物性食品中四環(huán)素類、喹諾酮類和磺胺類多殘留量的檢測。

 

表-2.豬肉樣品加標(biāo)回收率及RSD值

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總結(jié)

● 在超聲提取步驟時(shí)使用冰水浴來進(jìn)行20 min的超聲，可減少由于長時(shí)間超聲引起的溫度升高，而造成目標(biāo)物的損失。

● 應(yīng)避免樣品在濃縮過程中長時(shí)間氮吹、過分濃縮干燥，否則可能會(huì)造成回收率損失。

● 本方法使用睿科Fotector Plus高通量全自動(dòng)固相萃取儀可實(shí)現(xiàn)凈化過程的自動(dòng)化，從活化到上樣、洗脫一步到位；最多一天能夠處理180個(gè)樣品，高效便捷地完成固相萃取過程。同時(shí)搭配?？艫uto EVA 80高通量全自動(dòng)平行濃縮儀進(jìn)行濃縮，二者的樣品架可兼容使用，無需進(jìn)行樣品轉(zhuǎn)移，操作連貫簡便，避免樣品的損失。