293T貼壁細胞轉(zhuǎn)染

貼壁細胞siRNA轉(zhuǎn)染步驟：

1、合成siRNA時請帶熒光，若siRNA不帶熒光、請使用熒光對照，方便查看轉(zhuǎn)染效率

2、siRNA濃度：20uM/L

3、siRNA和轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物制備：siRNA 8ul和轉(zhuǎn)染試劑8ul，吹打混勻室溫靜置15分鐘，無需另外加入任何試劑稀釋

4、細胞轉(zhuǎn)染前狀態(tài)：拍明場細胞照片留存

5、貼壁細胞鋪板：6孔板*培養(yǎng)基2ml、培養(yǎng)基中不加雙抗，細胞密度：60%左右（不同細胞，按48小時生長到90%，往前推算細胞鋪板密度）

6、轉(zhuǎn)染：將復(fù)合物加入輕搖混勻、培養(yǎng)箱培養(yǎng)

7、換液：轉(zhuǎn)染24小時后培養(yǎng)基換液

8、轉(zhuǎn)染效率：轉(zhuǎn)染48小時后拍熒光照片，查看轉(zhuǎn)染效率

9、轉(zhuǎn)染后細胞狀態(tài)：拍明場細胞狀態(tài)照片

10、檢測：總計轉(zhuǎn)染48小時后提取RNA或蛋白檢測

貼壁細胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染步驟：

1、質(zhì)粒提?。菏褂脽o內(nèi)毒素提取試劑盒

2、質(zhì)粒溶解：溶于超純水或雙蒸水，一定不能溶于試劑盒Buffer等其他試劑

3、質(zhì)粒熒光：若質(zhì)粒不帶熒光、請使用熒光對照，方便查看轉(zhuǎn)染效率

4、質(zhì)粒濃度：500-600ng/ul

5、質(zhì)粒和轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物制備：取質(zhì)粒8ug和轉(zhuǎn)染試劑8ul混合，吹打混勻室溫靜置15分鐘，無需另外加入任何試劑稀釋

6、細胞轉(zhuǎn)染前狀態(tài)：拍照片留存

7、貼壁細胞鋪板：6孔板*培養(yǎng)基2ml、培養(yǎng)基中不加雙抗，細胞密度：60%左右

8、轉(zhuǎn)染：將復(fù)合物加入輕搖混勻、培養(yǎng)箱培養(yǎng)

9、換液：轉(zhuǎn)染24小時后培養(yǎng)基換液

10、轉(zhuǎn)染效率：轉(zhuǎn)染48小時后拍熒光照片，查看轉(zhuǎn)染效率

11、轉(zhuǎn)染后細胞狀態(tài)：拍明場細胞狀態(tài)照片

12、檢測：總計轉(zhuǎn)染48小時后提取RNA或蛋白檢測