單克隆篩選是根據(jù)細(xì)胞所具有的特性將單個(gè)細(xì)胞從混合的細(xì)胞樣品中分離出來的?種技術(shù),是抗體制備細(xì)胞株優(yōu)化、穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株構(gòu)建、藥物靶點(diǎn)篩選等應(yīng)?中重要的?環(huán),能夠更好地為不同鄰域科學(xué)研究和藥物研發(fā)提供支持。
一、特點(diǎn):
1、通用性篩選:適用于多種細(xì)胞,無需攜帶抗性熒光標(biāo)簽。
2、單列線性模式:適用于高價(jià)值細(xì)胞。
3、提供克隆性證據(jù):可為每個(gè)克隆提供克隆形成圖像。
4-溫和的微流控技術(shù):更高存活率,更低損失率。
二、單克隆篩選的方法
1、有限稀釋法:克隆/亞克?。悍蛛x單個(gè)細(xì)胞置入多孔培養(yǎng)板的每個(gè)孔中培養(yǎng)。然后,用ELISA檢測(cè)培養(yǎng)上清來判斷是否有產(chǎn)生目的抗體的單克隆生成。
2、檢測(cè)每孔細(xì)胞是否產(chǎn)生針對(duì)目的抗原表達(dá)的抗體,所以篩選的條件是兩層意思:單個(gè)細(xì)胞單孔培養(yǎng)保證每個(gè)孔中的細(xì)胞在產(chǎn)生抗體時(shí)是針對(duì)同一抗原的同一抗原決定簇產(chǎn)生的的,但每個(gè)孔中細(xì)胞卻不一定都能產(chǎn)生抗體,把那些不產(chǎn)生抗體的細(xì)胞淘汰,對(duì)能分泌針對(duì)抗原某一決定簇抗體的陽性細(xì)胞選擇下來繼續(xù)克隆,從而保證大量的生產(chǎn)所需抗體。
3、對(duì)選擇下來的細(xì)胞進(jìn)行克隆方法有兩種:一種可以在體外培養(yǎng);一種可以一直到小鼠腹腔中增殖,即可從中提取所需要的單克隆抗體。
三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
實(shí)驗(yàn)結(jié)果以總細(xì)胞孔(如96孔)中出現(xiàn)克隆孔統(tǒng)計(jì)出克隆百分率,并可進(jìn)一步按單細(xì)胞孔、雙細(xì)胞孔、多細(xì)胞孔分別計(jì)算。
四、注意事項(xiàng):
1、注意無菌操作,一旦發(fā)現(xiàn)污染(孔)必須及時(shí)處理;
2、計(jì)數(shù)細(xì)胞要求準(zhǔn)確,稀釋量亦要準(zhǔn)確,否則將造成一孔多細(xì)胞克隆或克隆百分離太低;
3、在計(jì)數(shù)克隆出現(xiàn)率之前,不宜更換培養(yǎng)液,也不宜強(qiáng)烈振動(dòng)培養(yǎng)板;
4、做克隆化培養(yǎng)的小牛血清必須是優(yōu)質(zhì)血清;
5、若做克隆抗體檢測(cè)時(shí),特別要保護(hù)細(xì)胞的生長狀況,防止細(xì)胞生長不良甚至丟失。
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