国产精品视频一区二区三区四,亚洲av美洲av综合av,99国内精品久久久久久久,欧美电影一区二区三区电影

產(chǎn)品推薦:氣相|液相|光譜|質(zhì)譜|電化學(xué)|元素分析|水分測定儀|樣品前處理|試驗(yàn)機(jī)|培養(yǎng)箱


化工儀器網(wǎng)>技術(shù)中心>操作使用>正文

歡迎聯(lián)系我

有什么可以幫您? 在線咨詢

單克隆分離的方法及具體介紹

來源:Bio-Techne   2022年05月06日 15:29  
  單克隆分離是建立穩(wěn)定細(xì)胞系的重要環(huán)節(jié),因而在現(xiàn)代生物技術(shù)和醫(yī)藥研發(fā)領(lǐng)域中應(yīng)用廣泛,構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞系的常用方法有質(zhì)粒轉(zhuǎn)染法和病毒侵染法,兩種方法都需要借助抗生素篩選,通過單細(xì)胞克隆分離獲得穩(wěn)定、遺傳特性一致的細(xì)胞群。
       通過單細(xì)胞克隆分離和抗生素篩選,獲得表達(dá)效率高、整合穩(wěn)定的細(xì)胞群,最終構(gòu)建成穩(wěn)定細(xì)胞系;而病毒侵染法則是通過將攜帶目的片段的病毒,常用的如慢病毒,轉(zhuǎn)導(dǎo)入細(xì)胞,再通過單細(xì)胞克隆和抗生素篩選,獲得穩(wěn)定細(xì)胞系。
  目前常規(guī)的單克隆分離技術(shù)主要包括有限稀釋法、克隆環(huán)法和顯微操作法。有限稀釋法是通過將細(xì)胞懸液連續(xù)梯度稀釋,使細(xì)胞培養(yǎng)板的一個(gè)孔中僅有1個(gè)細(xì)胞,再經(jīng)過兩周左右時(shí)間增殖,形成細(xì)胞群,再經(jīng)過驗(yàn)證獲得穩(wěn)定克??;克隆環(huán)法是通過在10-15cm的細(xì)胞培養(yǎng)皿中,將細(xì)胞接種低密度,使分散的單個(gè)細(xì)胞各自增殖成細(xì)胞群,用克隆環(huán)方式與周圍的細(xì)胞隔離開,通過胰酶消化,轉(zhuǎn)到新的孔板中繼續(xù)培養(yǎng)擴(kuò)增,并檢測驗(yàn)證而獲得穩(wěn)定克??;顯微操作法是借助顯微鏡,在放大的視野下挑取單細(xì)胞,再轉(zhuǎn)至培養(yǎng)孔中,逐漸擴(kuò)增獲得單克隆。
  哺乳動(dòng)物細(xì)胞通過分離、稀釋接種,培養(yǎng)在適宜于單細(xì)胞生長的培養(yǎng)液中,形成細(xì)胞克隆,運(yùn)用這項(xiàng)技術(shù)可以制作細(xì)胞成活曲線,即在接種相同數(shù)量細(xì)胞的培養(yǎng)瓶中,加入不同濃度的化學(xué)藥品,或照以不同劑量的射線,觀察其對(duì)細(xì)胞的聽見害程度,由此可以在哺乳類細(xì)胞中進(jìn)行誘變試驗(yàn)及分離突變細(xì)胞。
  方法:
  a、在培養(yǎng)皿中制備飼養(yǎng)細(xì)胞(小鼠腹腔細(xì)胞)單層。
  b、臨用前將2.0%瓊脂糖生理鹽水溶液與等量雙倍濃度的HT培養(yǎng)液混勻,配成1%瓊脂糖培養(yǎng)液,45℃水浴中溫育。
  c、吸去平皿上層培養(yǎng)液,加入1%瓊脂糖培養(yǎng)液3ml,室溫10分鐘。
  d、取雜交瘤細(xì)胞懸液1ml,加入1%瓊脂糖培養(yǎng)液1ml混勻,鋪于上層。
  e、37℃、7.5%濕潤培養(yǎng)7-14天,克隆生長至2mm時(shí),用毛細(xì)吸管吸出克隆,直接轉(zhuǎn)種于含有飼養(yǎng)細(xì)胞的24孔板,擴(kuò)大培養(yǎng)。
  f、吸取上清,檢測抗體,陽性孔可繼續(xù)克隆化,或擴(kuò)大培養(yǎng)、凍存。

免責(zé)聲明

  • 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
  • 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé),不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí),必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
  • 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題,請?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
企業(yè)未開通此功能
詳詢客服 : 0571-87858618
阿图什市| 福建省| 阿拉善盟| 泽库县| 嘉峪关市| 吴忠市| 内乡县| 延吉市| 锡林郭勒盟| 红原县| 五台县| 荣昌县| 东乌珠穆沁旗| 开鲁县| 珠海市| 西畴县| 吉木乃县| 松溪县| 拜泉县| 鄂尔多斯市| 大田县| 滕州市| 渑池县| 南昌市| 沁源县| 建湖县| 闽清县| 土默特右旗| 五莲县| 淮安市| 开鲁县| 会东县| 彭泽县| 墨脱县| 桐乡市| 谷城县| 洛扎县| 咸丰县| 丰原市| 北安市| 仁化县|