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程序降溫盒內(nèi)異丙醇的量必須高于刻度線；凍存5次后異丙醇需要更換一次，以免影響凍存效果。細(xì)胞凍存后應(yīng)取出一管復(fù)蘇，檢測(cè)細(xì)胞的存活率。理論上細(xì)胞可在液氮內(nèi)長(zhǎng)期保存，為穩(wěn)妥起見(jiàn)可在細(xì)胞凍存半年后復(fù)蘇培養(yǎng)，觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，再繼續(xù)凍存。凍存細(xì)胞十分脆弱，必須輕柔操作。除少數(shù)對(duì)冷凍保護(hù)劑（DMSO或甘油）敏感的細(xì)胞，絕大部分細(xì)胞在解凍之后，可直接接種到*培養(yǎng)基中，隔天再換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO 和死細(xì)胞，如此可避免大部分解凍后細(xì)胞無(wú)法生長(zhǎng)或貼壁的問(wèn)題，也可因不離心，減少了操作步驟，降低污染的幾率。
關(guān)于程序降溫盒，您不得不知道的這些事兒！
程序降溫盒要不要加異丙醇？
不需要。利用自身*設(shè)計(jì)進(jìn)行降溫：內(nèi)層金屬合金芯快速降溫-外曾絕緣聚乙烯泡沫隔熱的相互配合達(dá)到平衡，實(shí)現(xiàn)-1攝氏度/min。不用異丙醇意味著多批次凍存效果沒(méi)有差異，且費(fèi)用低（無(wú)需每五次更換異丙醇），無(wú)有害廢棄物。同時(shí)無(wú)需預(yù)冷，蓋子不凍粘，當(dāng)從冰箱里拿出凍存盒時(shí)不會(huì)凍到手指。
當(dāng)把冷凍樣品從取出保存時(shí)，凍存管是否一定要放在干冰上而不是普通的冰上?
細(xì)胞凍存管從 取出后，必須盡快的轉(zhuǎn)移到液氮中進(jìn)行存儲(chǔ)。在液氮存儲(chǔ)之前，如果冰箱距離液氮位置較遠(yuǎn)或需要較長(zhǎng)時(shí)間轉(zhuǎn)移，為了保持細(xì)胞低溫冷凍的狀態(tài)，我們推薦將細(xì)胞放在-78°C干冰上；若將細(xì)胞凍存管放置在普通的冰上，凍存管溫度會(huì)顯著升高，降低細(xì)胞解凍后的活力和功能。這個(gè)問(wèn)題的答案同樣適用于其它程序降溫盒或凍存方式。
循環(huán)使用間隔的時(shí)間？
5-10min。細(xì)胞取出放到液氮后，可將金屬合金芯取出，室溫下10min左右就可升到室溫。如需要更快速度，也可以將金屬合金芯放入37度水浴鍋，可在非常短的時(shí)間內(nèi)升溫。在使用前別忘了用酒精擦拭消毒，確保干燥且無(wú)菌。
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