分析細(xì)胞狀態(tài)不好原因:
一、胰酶消化過度
在用胰酶消化細(xì)胞使其不貼壁的時(shí)候,如果消化時(shí)間過長,會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞膜表面蛋白也被破話,嚴(yán)重者可致細(xì)胞破碎、死亡。所以胰酶消化不宜過久。如果消化了好久(具體消化時(shí)間視細(xì)胞而定)在鏡下看還有很多細(xì)胞貼壁,可能是胰酶消化力弱。增強(qiáng)胰酶消化能力的方法:消化前用PBS洗以去除血清中的各種蛋白;在胰酶中加入EDTA;在消化前胰酶37攝氏度預(yù)熱。
二、傳代比例太低
細(xì)胞在培養(yǎng)基中生長的時(shí)候,除了外源營養(yǎng)物質(zhì),其自身也會(huì)分泌促進(jìn)生長的物質(zhì)。如果一個(gè)皿中細(xì)胞數(shù)量太少,細(xì)胞分泌的營養(yǎng)物質(zhì)支撐不了“一大家子”的細(xì)胞,細(xì)胞狀態(tài)就不好。不要因?yàn)橥祽卸鴾p少傳代比例,以及細(xì)胞懸液要吹打均勻讓傳代的細(xì)胞就是你要的比例。
三、污染
在(細(xì)菌或真菌)污染的早期,還未出現(xiàn)明顯的細(xì)胞外形被嚴(yán)重破壞、培養(yǎng)基變黃的時(shí)候,細(xì)胞可能出現(xiàn)大量死亡、形狀怪異、有大團(tuán)細(xì)胞簇?fù)淼默F(xiàn)象。這時(shí)候你再養(yǎng)一兩天,就能看到細(xì)胞變成馬賽克(細(xì)菌污染)或者培養(yǎng)基肉眼可見渾濁有絮絮(真菌污染)。
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