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Celetrix電轉(zhuǎn)基本原理

來源:北京奧利賽克生物科技有限公司   2022年05月18日 10:27  

電轉(zhuǎn)基本原理

1. 電轉(zhuǎn)技術(shù)原理

細(xì)胞電轉(zhuǎn)染(電轉(zhuǎn)),也叫細(xì)胞電穿孔 (electroporation),是把外源大分子物質(zhì)DNA、RNA、siRNA、蛋白質(zhì)等以及一些小分子導(dǎo)入細(xì)胞膜內(nèi)部的重要方法。

在瞬間強(qiáng)大電場的作用下,溶液中細(xì)胞的細(xì)胞膜具有了一定的通透性,帶電的外源物質(zhì)以類似電泳的方式進(jìn)入細(xì)胞膜。由于細(xì)胞膜磷脂雙分子層的電阻很大,細(xì)胞外部電流場產(chǎn)生的細(xì)胞兩極電壓都被細(xì)胞膜承受,細(xì)胞質(zhì)內(nèi)分到的電壓可以忽略不計(jì),細(xì)胞質(zhì)內(nèi)部幾乎沒有電流,因此也決定了正常范圍內(nèi)的電轉(zhuǎn)過程中細(xì)胞毒性很小。電場使DNA等物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞膜后只能停止在細(xì)胞膜附近,隨后細(xì)胞本身的機(jī)制可以允許這些物質(zhì)到細(xì)胞核等處。

普通電轉(zhuǎn)能量過高可導(dǎo)致部分細(xì)胞因膜破壞而死亡,其中能存活下來的細(xì)胞內(nèi)部都不會(huì)受到電流影響,因?yàn)榧?xì)胞膜完整是細(xì)胞存活的必要條件。

由于電轉(zhuǎn)技術(shù)依靠的是物理方法,細(xì)胞表面的分子特性對(duì)電轉(zhuǎn)影響比較小。相比化學(xué)轉(zhuǎn)染方法和病毒載體轉(zhuǎn)染方法,電轉(zhuǎn)可以用在所有的細(xì)胞種類上,而且容易定量控制。


2. 細(xì)胞電轉(zhuǎn)電場圖

電轉(zhuǎn)基本原理插圖 細(xì)胞膜近似絕緣體,細(xì)胞附近電轉(zhuǎn)液中電流扭曲。
電轉(zhuǎn)基本原理插圖 在串聯(lián)電路中電阻越大分到電壓越大,細(xì)胞兩端電壓基本都落在兩端細(xì)胞膜上。
電轉(zhuǎn)基本原理插圖 只有一個(gè)細(xì)胞端面電轉(zhuǎn)有效。
電轉(zhuǎn)基本原理插圖 細(xì)胞質(zhì)內(nèi)分到電壓很小,DNA電轉(zhuǎn)進(jìn)入細(xì)胞膜后馬上停止,后續(xù)靠細(xì)胞本身機(jī)制慢速擴(kuò)散。
電轉(zhuǎn)基本原理插圖 細(xì)胞核兩端電壓及其微小,微小的電壓又落在核膜上,核內(nèi)部*沒有電壓,電轉(zhuǎn)沒有基因毒性。

電轉(zhuǎn)基本原理插圖1


3. 電轉(zhuǎn)技術(shù)應(yīng)用

電轉(zhuǎn)基本原理插圖有效的細(xì)胞:幾乎所有的真核細(xì)胞,包括所有細(xì)胞系,原代細(xì)胞,干細(xì)胞,血液和免疫類細(xì)胞,神經(jīng)細(xì)胞,植物細(xì)胞和胚胎。

電轉(zhuǎn)基本原理插圖可以電轉(zhuǎn)的物質(zhì)包括DNA、RNA、siRNA、蛋白質(zhì)等。

電轉(zhuǎn)基本原理插圖適用實(shí)驗(yàn):瞬時(shí)或穩(wěn)定表達(dá)蛋白質(zhì)、基因敲除與敲入、siRNA和其他分子機(jī)制研究。

電轉(zhuǎn)基本原理插圖科研領(lǐng)域:細(xì)胞分子生物學(xué)、免疫學(xué)、血液學(xué)、神經(jīng)學(xué)、癌癥研究、新藥開發(fā)等。

4. 為什么電轉(zhuǎn)直接進(jìn)入細(xì)胞核是錯(cuò)誤的

1.細(xì)胞核轉(zhuǎn)染違反物理學(xué)原理。

細(xì)胞膜近似絕緣體,細(xì)胞附近電轉(zhuǎn)液中電流扭曲。在串聯(lián)電路中電阻越大分到電壓越大,細(xì)胞兩端電壓基本都落在兩端細(xì)胞膜上。只有一個(gè)細(xì)胞端面電轉(zhuǎn)有效。細(xì)胞質(zhì)內(nèi)分到電壓很小,DNA電轉(zhuǎn)進(jìn)入細(xì)胞膜后馬上停止,后續(xù)靠細(xì)胞本身機(jī)制慢速擴(kuò)散。細(xì)胞核兩端電壓及其微小,微小的電壓又落在核膜上,核內(nèi)部*沒有電壓,電轉(zhuǎn)沒有基因毒性。

電轉(zhuǎn)基本原理插圖2

2.文獻(xiàn)中已經(jīng)報(bào)導(dǎo)電轉(zhuǎn)后DNA僅在細(xì)胞膜附近(Golzio et al.)。

電轉(zhuǎn)基本原理插圖3

3.細(xì)胞核轉(zhuǎn)染沒有實(shí)驗(yàn)證據(jù)。

4.細(xì)胞本身可以讓DNA進(jìn)入細(xì)胞核。比如Celetrix電轉(zhuǎn)后30分鐘就可以看到GFP熒光表達(dá)。




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