賽默飛液相色譜分析儀現(xiàn)已成為有機化學分析的重要手段之一。同樣,在食品分析中,無論是殘留分析還是成分分析,HPLC也已成為*的分析儀器。和其它分析儀器一樣,你若想讓HPLC很好地為你工作、得到可靠的數(shù)據(jù),首先你要保養(yǎng)好它,使它處于一個良好的待機狀態(tài),這樣你操作它進行分析時就可以比較順利地獲得理想的結(jié)果。而且良好規(guī)范的操作習慣可以延長儀器使用壽命。
大家在學?;蚪邮軆x器公司培訓的時候,老師會提出很多的操作注意事項。但要是總結(jié)歸納一下,最重要的有三點:脫氣、過濾和沖洗。下面圍繞這三點進行討論, 給新從事賽默飛液相色譜分析儀的工作者一點操作建議,希望能對正確的操作儀器有一點幫助。
1、脫氣:
流動相脫氣對于避免HPLC系統(tǒng)出問題,順利得到一個理想的數(shù)據(jù)是一個很有效的措施。HPLC系統(tǒng)內(nèi)是不希望有氣泡存在的。HPLC泵在輸送液體時要產(chǎn)生很大的力量,由于氣體的壓縮比與液體相比大的多,因而當氣泡存在時,你將觀察到瞬間的流速降低和系統(tǒng)壓力下降。
如果這個氣泡足夠大,液相泵將不能輸送任何溶劑,而且如果壓力低于預先設(shè)定的壓力低限,泵將停止工作。有些泵設(shè)計可以很好地排除氣泡,而也有一些泵設(shè)計當氣泡存在時將停止運轉(zhuǎn)。當一個氣泡通過輸液泵時,由于系統(tǒng)壓力大,氣泡通常會溶解在流動相溶液中,隨流動相通過柱子。
但是到達檢測器流通池時系統(tǒng)壓力又恢復到了大氣壓,因而氣泡可能在檢測器流通池中又顯現(xiàn),在色譜圖上會出現(xiàn)不規(guī)律的毛刺。為解決這個問題,有些儀器公司設(shè)計一個反壓控制器,這樣可以在檢測器出口提供足夠的壓力保持氣泡始終溶解在流動相中直到它們流出檢測器。當然,這個壓力不能超過流通池所能承受的壓力極限,否則可能損壞檢測器。紫外/可見光(UV/VIS)檢測器的液相色譜圖中的噪音毛刺通常是氣泡進入并通過流通池的征兆。
2、過濾:任何顆粒物進入HPLC系統(tǒng)后都會在柱子入口端被篩板擋住,最后的結(jié)果是將柱子堵塞,表現(xiàn)出的特征是系統(tǒng)壓力增加并使色譜峰變形。因此,要采取各種預防措施,包括操作步驟和商品儀器自身的各種過濾設(shè)計,努力防止或減少顆粒物進入HPLC系統(tǒng)中,從而延長儀器和色譜柱的使用壽命,并提高數(shù)據(jù)的可靠性。在HPLC系統(tǒng)中,顆粒物的主要來源有三個途徑:流動相、被測樣品和儀器系統(tǒng)部件的磨損物。
3、沖洗:使HPLC系統(tǒng)良好運行的第三個要點是保持系統(tǒng)的清潔。你需要關(guān)注流動相流經(jīng)該系統(tǒng)的所有地方,對于這些地方經(jīng)常性的沖洗,將使你的系統(tǒng)保持在“Ready”狀態(tài)。
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