基因電轉(zhuǎn)染儀作為物理方法的一種,不僅能將DNA、RNA,還能將抗體、酶及其他生物活性分子轉(zhuǎn)入細菌、酵母、動物細胞和植物細胞。它是一種簡便的基因轉(zhuǎn)移系統(tǒng),具有其他轉(zhuǎn)移方法不能對比的*性,如操作簡便、快捷,可重復性強,轉(zhuǎn)染率高,適用廣譜等,尤其對目前一般認為難轉(zhuǎn)的懸浮培養(yǎng)細胞也能獲得較高的轉(zhuǎn)染。
電穿孔法是通過電場作用于細胞幾微秒到幾毫秒之后,在細胞膜上暫時形成小孔或開口,把大分子如DNA等導入細胞并進入細胞核的技術(shù)。其過程簡述如下:首先在電擊過程中,細胞膜上出現(xiàn)穿孔,質(zhì)粒在電泳力的作用下與細胞膜接觸,并在細胞膜上電穿孔的區(qū)域形成一種可轉(zhuǎn)移的復合物。再次電擊后,質(zhì)粒脫離復合物并擴散至細胞質(zhì)內(nèi),開始瞬轉(zhuǎn);同時小部分質(zhì)粒進入核內(nèi)與染色體整合,開始穩(wěn)轉(zhuǎn)。一旦DNA擴散至細胞,膜上小孔會關(guān)閉。
淺析基因電轉(zhuǎn)染儀脈沖過程:
1)脈沖波形
脈沖波形主要分為兩種:1、方波脈沖;2、指數(shù)遞減波脈沖。方波脈沖是指:電壓瞬間升至預設(shè)電壓,保持電壓放電,然后瞬間終止放電。一般哺乳動物細胞電轉(zhuǎn)染時選擇方波脈沖,有較高的轉(zhuǎn)染效率和細胞存活率。指數(shù)遞減波脈沖是指:先對電容充電,然后讓電容*放電,其電壓變化呈指數(shù)遞減。一般這種波形的脈沖電轉(zhuǎn)染適用于細菌、酵母菌、昆蟲細胞。
2)脈沖時間
脈沖時間的選定主要取決與脈沖波形。在方波脈沖中,脈沖時間可直接設(shè)定。在指數(shù)遞減波脈沖中,脈沖時間是指電壓衰減至初始電壓1/3時所用的時間,等于電容(C)與電阻(R)的乘積,單位是ms。在參數(shù)優(yōu)化中,增加電壓應當降低脈沖時間,而減小電壓則應當增大脈沖時間。
相關(guān)產(chǎn)品
免責聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負責,不承擔此類作品侵權(quán)行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時,必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,并自負版權(quán)等法律責任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題,請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。