48道基因合成儀的優(yōu)點(diǎn)是什么?
1.合成周期短,可以保證序列正確無(wú)誤。
2.基因合成具有更大的靈活性,可以對(duì)基因的酶切位點(diǎn)和基因序列進(jìn)行修改,方便下游的克隆和實(shí)驗(yàn)。
3.研究人員根據(jù)自己的意愿設(shè)計(jì)得到自然界中很難獲得甚至不存在的基因。
4.基因合成的基因可以進(jìn)行密碼子優(yōu)化,使基因在各種生物表達(dá)體系中都能得到良好表達(dá)。
48道基因合成儀使用的步驟如下:
1)仔細(xì)檢查合成儀上所有試劑瓶中的試劑量,必要時(shí)換掉試劑瓶,特別注意乙腈的量,因?yàn)樵撊軇┯昧枯^大。
2)將標(biāo)記好的清潔的收集瓶裝在合成儀上。
3)將要合成的DNA序列輸入合成儀。
4)檢查選擇的合成步驟是否正確。
5)選擇結(jié)束方法:TritylOffAuto是儀器的原始狀態(tài),若打算以5,—DMT基團(tuán)連接純化寡核苷酸,將其轉(zhuǎn)變?yōu)門(mén)ritylOnAuto結(jié)束狀態(tài)。
6)選擇結(jié)束方法,一般為系統(tǒng)的原始狀態(tài)。
7)在每個(gè)柱監(jiān)視器的Username下,輸入你所希望的保存名字。
8)以代碼代替相應(yīng)的DNA序列標(biāo)記每一個(gè)收集瓶。
9)打印出每一個(gè)柱設(shè)置的詳細(xì)資料。
10)檢查打印出來(lái)的資料是否正確。
11)運(yùn)行StartColumn步驟檢查每一個(gè)柱的位置,確保合成儀上合成柱處于正確的位置。
12)檢查連接在合成儀上的溶劑殘留(廢液瓶)是否充滿(mǎn)。
13)如果分部收集器用來(lái)收集每個(gè)DMT脫保護(hù)步驟的流出物,確保試管充分清潔干凈,并打開(kāi)分部收集器,確保DMT廢液管路通向分部收集器。
14)啟動(dòng)循環(huán),運(yùn)行開(kāi)始程序清洗試劑管路,除去原來(lái)的試劑。
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