天津中醫(yī)藥大學(xué)的研究學(xué)者通過QTRAP^® 系統(tǒng)*的多種采集模式復(fù)合聯(lián)用的方式，采用四種掃描模式（EMS-IDA-EPI，Pre-IDA-EPI，NL-IDA-EPI，pMRM-IDA-EPI）互為補(bǔ)充的新策略，并結(jié)合LightSight^™軟件自動(dòng)預(yù)測(cè)相似結(jié)構(gòu)未知物的功能，提出了一種新穎、靈敏且簡(jiǎn)單的策略，用于系統(tǒng)、高效、快速的分析鑒定SLI中的活性成分。

從 SLI 中鑒定出總共 171 種化合物。其中，27個(gè)痕量成分以前沒有報(bào)道過。這種策略可以顯著提高對(duì)于SLI中大量痕量活性成份的鑒定及異構(gòu)體的區(qū)分，從而全面的鑒定到SLI中不同含量分布的活性成份。另外，對(duì)定性結(jié)果選出的13個(gè)代表性成份在15批次SLI中進(jìn)行準(zhǔn)確定量。其中，丹酚酸 A (Sal A)、Sal B、Sal D、紫精酸 (LA) 和迷迭香酸 (RA) 被證明是主要成分。

研究表明，這種新策略可以顯著提高對(duì)于未發(fā)現(xiàn)的化學(xué)成分的鑒定，為鑒定其它中藥的有效成分提供了很好的思路。

樣品：制備樣品SLI時(shí)，用1 mL超純水稀釋。離心，過濾，上機(jī)分析。

標(biāo)準(zhǔn)品信息：：

標(biāo)準(zhǔn)品：丹參素、咖啡酸、阿魏酸、異芥酸、丹酚酸C、原兒茶酸、紫草酸、香草醛酸、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸D、原兒茶酸醛、迷迭香酸。

通過將標(biāo)準(zhǔn)溶液與10%ACN的混合物連續(xù)稀釋，制備了一系列工作標(biāo)準(zhǔn)溶液。

如圖3所示，將pMRM、EMS、Prec和NL四種采集方式進(jìn)行了韋恩圖匯總，表明四種采集方式均有各自的優(yōu)勢(shì)。在這四種掃描模式的幫助下，共鑒定到171種成分（詳見原文），其中12種與標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照確認(rèn)，保證鑒定準(zhǔn)確度。由于pMRM 模式出色的靈敏度和選擇性，可鑒定多達(dá)168 種化合物。EMS掃描模式排在第二位，檢測(cè)到 76 種成分；Prec 和NL掃描模式大約有30個(gè)成份。這些成份主要分為以下類型：?jiǎn)误w、二聚體、三聚體、四聚體酚酸及其異構(gòu)體和衍生物（即糖基化、烷基化、水解、脫氧、脫羧、脫氫、氧化等）。此外，27種痕量成分以前從未報(bào)告過。

根據(jù)QTRAP質(zhì)譜的復(fù)合式掃描方式，首先使用基于QTRAP質(zhì)譜的EMS-IDA-EPI 掃描來獲取非靶向化學(xué)信息，可以全面挖掘分析物的MS碎片信息。然后利用代表性組分的典型碎片離子進(jìn)行半靶向的Prec和NL-IDA-EPI 掃描，可以選擇性地檢測(cè)與母核結(jié)構(gòu)相似的化合物，從而得到更多結(jié)構(gòu)相關(guān)且含量相對(duì)較高的化合物。隨后，總結(jié)了碎片離子的特征和典型性，以及可能的衍生代謝途徑，開發(fā)出靈敏度和選擇性更高的pMRM-IDA-EPI 掃描方法，從而鑒定到不同濃度水平的活性成份，尤其是痕量化合物。因此，EMS、Prec和NL-IDA-EPI可以被視為pMRM-IDA-EPI 的有利補(bǔ)充策略，以獲取更多對(duì)結(jié)構(gòu)解析有用的片段信息。

如圖4所示，化合物48和50（圖4A和4B）通過EMS檢測(cè)到，而47和38（圖4C和4D）通過Prec（m/z109）和NL（198Da）分別檢測(cè)到。

所有13種分析物均顯示出良好的線性關(guān)系，線性相關(guān)系數(shù)r值大于0.997。通過向樣品中添加低中高三個(gè)濃度的加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，從而考察本方法的回收率和精密度。對(duì)每種濃度水平進(jìn)行一式三份分析，目標(biāo)化合物的回收率在77.05%到99.30%之間，RSD值在0.45%到5.80%之間。

通過SLI的15批次樣本進(jìn)行定量分析，從圖7可以看出，13種成分的含量差別很大。丹酚酸A（Sal A）、Sal B、Sal D、紫草次酸（LA）和迷迭香酸（RA）是主要成分。其中，Sal B的含量最高（195.08-350.46μg/mg），然后是LA、Sal A和RA。但是，香草醛、阿魏酸、Sal C、原兒茶醛和原兒茶酸的含量較低，這些也是SLI的重要活性成分。