Rho1D4 tag / 1D4 tag

Rho1D4，也叫“1D4”，是一種親和標(biāo)記物，包含了九種氨基酸(T-E-T-S-Q-V-A-P-A)。該標(biāo)記物優(yōu)先與目標(biāo)蛋白的C端結(jié)合。瓊脂糖和磁珠與相對(duì)應(yīng)的Rho1D4-抗體能夠純化標(biāo)記了Rho1D4標(biāo)簽的蛋白。Rho1D4蛋白純化實(shí)驗(yàn)不僅擁有基于其它抗體為基礎(chǔ)的蛋白純化特別高的專一特異性，并且蛋白的產(chǎn)量也很高。關(guān)于Rho1D4的更多信息，我們撰寫了一本指南為您提供所有必須信息。

產(chǎn)品技術(shù)參數(shù)

為什么選擇庫(kù)柏生物（Cube Biotech）的Rho1D4 Tag蛋白純化產(chǎn)品?

選擇Cube Biotech公司的理由有很多。以下為其中幾點(diǎn):

（1）標(biāo)記的大小：902.9 Da， 9個(gè)氨基酸(TETSQVAPA)

（2）每毫升樹脂蛋白產(chǎn)量：3-4 mg/ml

（3）相互作用的特異性：KD：20 nM

（4）洗脫條件：Rho1D4肽、低pH值或標(biāo)記裂解

Cube Biotech的Rho1D4親和蛋白純化的產(chǎn)品概覽：

Rho1D4蛋白純化支持產(chǎn)品:

Cube Biotech的Rho1D4產(chǎn)品在以下論文刊物中出現(xiàn)：

高特異性和高產(chǎn)量的蛋白純化

PureCube系列瓊脂糖依據(jù)嚴(yán)格的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行生產(chǎn)，每一批次均經(jīng)過質(zhì)量檢驗(yàn)，以確保加載的基質(zhì)具有高蛋白載量。由于抗原-抗體表位相互作用的特異性，針對(duì)目標(biāo)蛋白優(yōu)化的純化操作流程可以產(chǎn)生高產(chǎn)量的洗脫組份。圖1 展現(xiàn)了趨化因子受體4（CXCR4）的純化過程。標(biāo)記的目標(biāo)蛋白在大腸桿菌中表達(dá)，用Fos-Choline®-14進(jìn)行溶解，并在裝有PureCube Rho1D4瓊脂糖的預(yù)裝柱上進(jìn)行純化。以Rho1D4肽作為洗脫劑，4個(gè)洗脫組分的蛋白質(zhì)總復(fù)原濃度為0.8、1.0、0.85和0.6mg/mL。通過western blot顯示CXCR4約在 65 kDa 和 35 kDa之間。這些條帶代表 39.7 kDa 膜蛋白的二聚體和單體。單體和二聚體的分離，就像去除洗脫肽的方式一樣，可以通過排阻層析的方式完成。

純凈且活性的膜蛋白

膜蛋白純化結(jié)果無法用更常用的瓊脂糖（如 Ni-NTA）進(jìn)行保存。因此，Rho1D4是您獲得純凈且活性的膜蛋白可以選擇的方式。

圖1.使用 Rho1D4 標(biāo)記膜蛋白成功純化的考馬斯亮藍(lán)色染色。A：~65kDa的蛋白質(zhì)單體。B：~135kDA的四聚體。C： 異二聚體，均可見亞基，和一條較小的不可識(shí)別條帶。懷疑為降解產(chǎn)物。

References:

1. Mattle D. et al.(2015). Mammalian Expression, Purification, and Crystallization of Rhodopsin Variants. In: Jastrzebska B. (eds) Rhodopsin. Methods in Molecular Biology, vol 1271. Humana Press, New York, NY

2. Brosig, A. et al (2019). The Axonal Membrane Protein PRG2 Inhibits PTEN and Directs Growth to Branches. Cell Reports. 29. 2028-2040.e8. 10.1016/j.celrep.2019.10.039.

3. Ahmed, Chulbul M., et al. "SRD005825 Acts as a Pharmacologic Chaperone of Opsin and Promotes Survival of Photoreceptors in an Animal Model of Autosomal Dominant Retinitis Pigmentosa." Translational Vision Science & Technology 8.6 (2019): 30-30.

4. Liu, Da-Wei et al. (2018). The Cone Opsin Repertoire of Osteoglossomorph Fishes: Gene Loss in Mormyrid Electric Fish and a Long Wavelength-Sensitive Cone Opsin That Survived 3R. Molecular Biology and Evolution. 10.1093/molbev/msy241.

5. Kotov, Vadim et al. (2019). High-throughput stability screening for detergent-solubilized membrane proteins. Scientific Reports. 9. 10.1038/s41598-019-46686-8.