BCA微量蛋白定量試劑盒

產(chǎn)品貨號：34021

產(chǎn)品規(guī)格：1000次

產(chǎn)品簡介：

BCA蛋白定量法是目前廣泛使用的蛋白定量方法之一。本產(chǎn)品是基于BCA（Bicinchoninic Acid）法研制而成，實現(xiàn)了對蛋白質(zhì)進行快速、穩(wěn)定、靈敏的濃度測定。其原理是在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì) 分子中的肽鏈結(jié)構(gòu)能與Cu²⁺絡(luò)合生成絡(luò)合物，同時將Cu²⁺還原成Cu⁺。BCA試劑可敏感特異地與Cu⁺結(jié)合，形成穩(wěn)定的有顏色的復(fù)合物。在562 nm處有高的光吸收值，顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比，可根據(jù)吸收值的大小來測定蛋白質(zhì)的含量。

本試劑盒專為低蛋白濃度樣品的蛋白定量而設(shè)計，可精確測定濃度為0.2-100μg/ml的蛋白溶液，試劑盒的靈敏性高，平行性好，不同種蛋白之間的測量差異極低。每個試劑盒可以檢測1000個樣品。

包裝清單：

操作步驟：

1.蛋白標準品的準備

取適量5mg/ml蛋白標準，用PBS稀釋至終濃度為100μg/ml。例如取10μl 5mg/ml蛋白標準，加入490μl PBS即可配制成100μg/ml蛋白標準。蛋白樣品在什么溶液中，標準品也宜用什么溶液稀釋。但是為了簡便起見，也可以用0.9% NaCl或PBS稀釋標準品。稀釋后的蛋白標準需-20oC長期保存。

2. 工作液配制

根據(jù)樣品數(shù)量，按1體積試劑C加25體積試劑B，混勻后加26體積試劑A，再次混勻（按照C-B-A的順序加，切勿更改加樣順序）。配制適量BCA工作液，充分混勻。

3. 蛋白濃度測定

a. 將標準品按0、5、10、20、40、60、80、100μl加到96孔板的標準品孔中，加標準品稀   釋液補足到100μl，相當于標準品濃度分別為0、5、10、20、40、60、80、100μg/ml。標準品濃度可根據(jù)實際實驗需求更改。

b. 加適當體積樣品到96孔板的樣品孔中。如果樣品不足100μl，需加標準品稀釋液補足到 100μl。請注意記錄樣品體積。

c. 各孔加入100μl工作液，60oC放置60分鐘。

d. 用酶標儀測定A562，或540-595nm之間的其他波長的吸光度。

e. 根據(jù)標準品濃度和A562值做出標準曲線，根據(jù)標準曲線和使用的樣品體積計算出樣品的蛋白濃度。

常見問題：

    1. 測定標準曲線時發(fā)現(xiàn)隨著標準品濃度的增加吸光度或顏色沒有明顯變化。

     可能的原因是樣品中含有嚴重干擾BCA法測定蛋白濃度的物質(zhì)。

2. 是否每次測定時都需要做標準曲線？

建議每次測定時都做標準曲線。因為BCA法測定時顏色會隨著時間的延長不斷加深，并且顯色反應(yīng)的速度和溫度有關(guān)，所以除非精確控制顯色反應(yīng)的時間和溫度，否則如需精確測定宜每次都做標準曲線。

注意事項：

    需酶標儀一臺，測定波長為540-595nm之間，562nm最佳。需96孔板。如果沒有酶標儀，也可以使用普通的分光光度計測定，但測定時，需根據(jù)比色皿的最小檢測體積，適當加大BCA工作液的用量使不小于最小檢測體積，樣品和標準品的用量可相應(yīng)按比例放大也可不變。使用分光光度計測定蛋白濃度時，每個試劑盒可以測定的樣品數(shù)量可能會顯著減少。?

    如發(fā)現(xiàn)樣品稀釋液或裂解液本身就有較高背景，請試用Bradford蛋白濃度測定試劑盒。

    EDTA濃度必須小于10mM，不兼容EGTA。不適用BCA法時，請試用Bradford蛋白濃度測定試劑盒。

    本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

    為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。