伴隨色譜技術(shù)的突飛猛進(jìn)，色譜柱層出不窮，C18鍵合填料是否封尾、雜化官能團(tuán)的鍵合、高強(qiáng)度硅膠的使用······色譜柱的填料沒有成千，也有上百。到底該如何選擇等效柱呢？我們憑什么說這兩根柱子是等效的?？梢哉f，色譜柱是色譜分析過程中最重要的部分，相當(dāng)于人體的“心臟”。根據(jù)自己要分析的樣品去選擇合適的液相色譜柱，需要考慮不同參數(shù)將會造成什么影響。比如色譜柱尺寸：柱長、內(nèi)徑；色譜柱填料：粒徑、孔徑、比表面積、基質(zhì)及其表面特征、載碳量鍵合相類型。

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如果藥物在USP中有收載，可以利用USP直接進(jìn)行查： 數(shù)據(jù)庫如下：直接點(diǎn)擊標(biāo)紅下拉列表，簡單選擇一款色譜柱，以Zorbax Eclipse XDB C18為例。

網(wǎng)頁會自動(dòng)根據(jù)色譜柱的相似性生成列表       其中F表示代表色譜柱比對函數(shù)，值越低代表相似性越好。那么，列表上方的Hy、CTF、CFA、TFA、BD分別代表什么意思呢？首先這些參數(shù)是USP方法中常使用的

在日常液相分析中，正確選擇適合自己實(shí)驗(yàn)的色譜柱，將會使得你的實(shí)驗(yàn)事半功倍！

色譜柱參數(shù)--- 柱長

兩支同填料的色譜柱，柱長越長，分離時(shí)間越長，但柱越長分離度將會更好，同時(shí)柱壓也將更大，可結(jié)合樣品的復(fù)雜性和希望的分離時(shí)間來選擇合適的柱長，一般為2.0~250mm。

色譜柱參數(shù)--- 內(nèi)徑

窄徑柱可提高柱的靈敏度，并可明顯降低溶劑的使用量；

寬徑柱可以將系統(tǒng)死體積的影響降到zui低，載樣量高，抗污染。

色譜柱參數(shù)--- 粒徑

例如：1.8μm、3μm、5μm、10μm等，粒徑越小，分離越快，柱效越高。但柱壓力越高，柱容易被污染，壽命低。

色譜柱參數(shù)--- 孔徑

孔徑小，含孔率高，則比表面積大，載碳量高。

色譜柱參數(shù)--- 比表面積

例如：180㎡/g、320㎡/g等（Ultimate系列為320㎡/g），選擇適合目標(biāo)物的比表面積，每克填料的表面積（與粒度、含孔率有關(guān))，比表面積大，會增加樣品與鍵合相之間的反應(yīng)，增加保留、載樣量增加,比表面積小可以縮短分析時(shí)間和梯度時(shí)的平衡時(shí)間。

色譜柱參數(shù)--- 載碳量

例如：10%、14%、17%、23%等，載碳量通常影響選擇性。硅膠表面鍵合相的比例，與比表面積，鍵合覆蓋度等有關(guān)。載碳量高，則保留增加，適合分析非極性化合物。制備色譜的上樣量也可以增加。

色譜柱參數(shù)--- 硅膠基質(zhì)

1. 硅膠基質(zhì)色譜柱較其他材料制成的柱子有更高的柱效；

2. 硅膠機(jī)械強(qiáng)度好；

3. 硅膠表面可化學(xué)修飾制成具有各種官能團(tuán)的鍵合相；

4. 硅膠填料不會發(fā)生體積的變化；

5. 硅膠在高pH值下會溶解；

6. 硅膠表面酸性，在分離堿性化合物時(shí)容易產(chǎn)生拖尾。

色譜柱參數(shù)--- 聚合物基質(zhì)填料

1. 交聯(lián)苯乙烯/二乙烯基苯、甲ji苯烯酸酯等；

2. pH穩(wěn)定性好：pH1-14；

3. 可以在很寬的范圍內(nèi)進(jìn)行表面化學(xué)處理以滿足反相色譜、離子交換色譜、疏水作用色譜和體積排阻色譜的需求；

4. 在中等pH條件下對強(qiáng)堿性物質(zhì)具有更好的峰形；

5. 填料的體積隨著流動(dòng)相的不同而改變，如膨脹或收縮；

6. 分離效率相對硅膠而言比較低；

7. 重現(xiàn)性不好；

8. 機(jī)械強(qiáng)度差。

色譜柱參數(shù) --- 硅醇基

硅醇基的酸性較大，可與堿性化合物由于靜電作用力而牢固的結(jié)合，因此含有較多殘留硅醇基的填料在分離堿性化合物時(shí)容易產(chǎn)生拖尾、變寬、保留延長等現(xiàn)象。

如何屏蔽剩余硅羥基的影響：加入適當(dāng)?shù)膾呶矂┤缛野房梢匝诒螝埩舻墓枇u基，使堿性化合物峰形變好；降低流動(dòng)相pH值小于3，可以減小硅醇基的反應(yīng)，從而減小拖尾現(xiàn)象?；蛘哌x擇優(yōu)先使用雙封尾的色譜柱。

色譜柱參數(shù) --- 封尾

為了降低硅醇基的影響，需要對色譜柱進(jìn)行封尾，通常為鍵合填料與小硅烷（如：三甲基硅烷）進(jìn)行后續(xù)反應(yīng)，屏蔽掉部分殘留硅醇基。

封尾的目的：1.屏蔽殘留的硅醇基；2.改善選擇性。

色譜柱參數(shù) --- 鍵合相的分類

鍵合相：反相（70%）；C18（65%）；C8（15%）；Cyano（5%）；苯基柱（<5%）；正相（20%；硅膠、-NH2、-CN）；其它（10% ；手性柱、離子交換柱）。 

同一廠家相同硅膠基質(zhì)的反相柱：保留值隨著碳載量的增加而增加；鍵合碳鏈越長，保留越大，C18≈C8＞C4＞C1，長鏈之間差異不大，根據(jù)待分析物質(zhì)的性質(zhì)，選擇合適的鍵合相和分離模式。