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骨切片的選擇?

來源:北京科瑞美科技有限公司   2022年06月27日 15:22  

        北京科瑞美公司的骨切片由牛股骨的皮質(zhì)部分制成,*適合96孔板,直徑6mm,大概200μm厚。采用傳統(tǒng)染色法和培養(yǎng)基ELISACrossLaps)骨破壞重吸收的體外精確檢測。


 骨是一種很有活力的組織,在人的一生中都在不斷地重建?,F(xiàn)已證實(shí),在骨中存在一些特殊物質(zhì),能夠影響到破骨細(xì)胞的活性。因此在北歐生物科技公司,我們使用高質(zhì)骨而不是牙質(zhì)應(yīng)用于研究。現(xiàn)在將向我們的客戶提供此類服務(wù)。


 每批骨切片通過重吸收檢測法來測試其質(zhì)量。在該檢測中,由骨切片上產(chǎn)生凹點(diǎn)證明破骨能力。隨后用培養(yǎng)基酶免吸附試劑盒Crosslaps檢測上清液。只有當(dāng)兩項(xiàng)測試都呈陽性時(shí),該骨切片才能用于進(jìn)一步的重吸收檢測。


 破骨細(xì)胞產(chǎn)生凹點(diǎn)的活性通過人破骨重吸收方法檢測。對(duì)破骨重吸收的定量分析可以采用傳統(tǒng)的對(duì)凹點(diǎn)染色方法,亦可使用培養(yǎng)基酶免吸附檢測法Crosslaps,


 由于破骨細(xì)胞實(shí)驗(yàn)往往需要較大量的蛋白質(zhì),而從牛骨切片中提取的蛋白質(zhì)用于96孔板,北歐生物科技公司開發(fā)了能夠*適用于612,24,48孔板的骨皮質(zhì)切片。


 將人破骨細(xì)胞分散覆蓋于牛骨皮質(zhì)片上,然后加入不同濃度的抗重吸收劑(A: 90 μM, B: 30 μM, C: 10 μM, D: 0 μM)。第6天取等量細(xì)胞培養(yǎng)上清液用于檢測膠原c端交聯(lián)肽(ctx)的量(培養(yǎng)基ELISA-CrossLaps,從骨片上轉(zhuǎn)移破骨細(xì)胞并且用阻凝蛋白蘇木精染色,形成可見的凹點(diǎn)


 我們推薦在轉(zhuǎn)移至96孔板之前,先將骨切片置于含培養(yǎng)基的10%血清中清洗三次。


 重吸收實(shí)驗(yàn)一般持續(xù)72小時(shí)(見圖2)。然而在加入試劑到破骨細(xì)胞培養(yǎng)液中1624小時(shí)后,就可觀察到細(xì)微的變化了,甚至8小時(shí)后即可用相應(yīng)方法觀察到。


 與凹點(diǎn)染色和劃線不同,培養(yǎng)基酶免吸附法Crosslaps不要求破骨細(xì)胞培養(yǎng)的終止。因此,可以從相同的股切片中獲得幾個(gè)樣品,從而使互換性檢測特定物質(zhì)影響下的破骨細(xì)胞活性成為可能。材料的處置與常見細(xì)胞培養(yǎng)物的處置相同。


【參考文獻(xiàn)】

1. HENRIKSEN ET AL. AM J PATHOL 164:1537-1545 (2004).

2. HOLLBERG ET AL. EXP CELL RES 279:227-238 (2002).

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