組氨酸標(biāo)簽是應(yīng)用最為廣泛的蛋白純化標(biāo)簽。其優(yōu)點(diǎn)包括標(biāo)簽尺寸小、低免疫原性、在蛋白自然和變形狀態(tài)下都保持有效性，在去污劑以及多種添加劑成分環(huán)境下均保持有效等多方面優(yōu)勢。為了進(jìn)一步提高純化體系在純化過程中的穩(wěn)定性，德國Cube Biotech生物公司現(xiàn)新推出了新型PureCube 100 INDIGO Ni-Agarose系列產(chǎn)品。這款新型的填料是以高交聯(lián)度且平均直徑為100 µm的瓊脂糖為基材，其可用于更高流速要求的重力柱純化和FPLC方面應(yīng)用。

PureCube 100 INDIGO Ni-Agarose系列采用了全新知識產(chǎn)權(quán)保護(hù)的INDIGO配基。這款產(chǎn)品能夠在20 mM DTT和20 mM EDTA環(huán)境下穩(wěn)定純化帶有組氨酸標(biāo)簽的蛋白（圖1）。和其它市面上同類產(chǎn)品比較，PureCube 100 INDIGO Ni-Agarose的也具有更高的蛋白結(jié)合能力。

圖1： PureCube 100 INDIGO Ni-Agarose 適用于 20 mM EDTA和20 mM DTT環(huán)境體系. SDS-PAGE顯示通過E.coli 表達(dá)的GFP通過 PureCube 100 INDIGO Ni-Agarose純化（純化體系含有20 mM EDTA和20 mM DTT）獲得很高的產(chǎn)量(>80 mg/ml) 及很高的純度。

這款新型的INDIGO配基不會(huì)被EDTA洗脫，也不會(huì)在清洗的過程中被高pH的NaOH破壞。在不需要任何重生的前提下，PureCube 100 INDIGO Ni-Agarose在被反復(fù)使用8次以上，而其純化的效率卻沒有任何降低（圖2）。

圖2：PureCube 100 INDIGO Ni-Agarose 可被反復(fù)使用多次而無須再生，純化效率并無明顯變化。 8份同樣含有GFP樣品通過1 ml PureCube 100 INDIGO Ni-Agarose進(jìn)行純化8輪純化。每輪之間純化體系只簡單使用緩沖液清洗（PBS 和10 mM咪唑）。 M: 參照, L: 細(xì)胞裂解液, S: 含有GFP的細(xì)胞裂解液.

為了方便在純化后用Western Blot實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證組氨酸標(biāo)簽蛋白，我們也提供高特異性組氨酸抗體—PentaHis antibody.

PureCube 100 INDIGO Ni-Agarose系列產(chǎn)品優(yōu)勢：

l 在環(huán)境中穩(wěn)定，實(shí)用pH為4-9

l 高結(jié)合率（高達(dá)８０ mg/ml）和高純度

l 可直接適用于真核細(xì)胞培養(yǎng)液

針對pull-down實(shí)驗(yàn)，德國Cube Biotech生物公司同時(shí)提供新型PureCube INDIGO Ni-MagBeads磁性微球系列。此系列同樣系列采用了全新知識產(chǎn)權(quán)保護(hù)的INDIGO配基并結(jié)合鎳離子。此系列產(chǎn)品在高達(dá)20 mM DTT 和 20 mM EDTA環(huán)境體系里具有很高的目標(biāo)蛋白結(jié)合能力（圖3）。每批PureCube INDIGO Ni-MagBeads濃度為25%。

圖3：使用 PureCube INDIGO Ni-MagBeads來純化組氨酸標(biāo)簽蛋白，即使在高達(dá)10 mM DTT和 20 mM EDTA的環(huán)境下仍可以得到很高的產(chǎn)量和純度：15 mL E.coli 細(xì)胞裂解液含有重組綠色熒光蛋白（GFP）和人 JNK1蛋白通過 250 µL PureCube INDIGO Ni-MagBeads 純化。 整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中使用的緩沖液含有 10 mM DTT 和 20 mM EDTA。每毫升磁珠最終純化總量 89 mg 的GFP 和48 mg JNK1 。（MW: 分子量.; E1-E3: 洗脫部分 1-3）