皮膚黑色素瘤細胞操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

小鼠苗條素(OB)ELISA試劑盒

小鼠苗條素(LEP)ELISA試劑盒

小鼠粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GMCSF/CSF2)ELISA試劑盒

小鼠可溶性E選擇素(sE-selectin)ELISA試劑盒

小鼠可溶性CD80(sCD80/B7-1)ELISA試劑盒

小鼠可溶性CD80(sCD80)ELISA試劑盒

小鼠巨細胞集落刺激因子(GM-CSF)ELISA試劑盒

小鼠巨噬細胞炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)ELISA試劑盒

小鼠巨嗜細胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)ELISA試劑盒

小鼠巨嗜細胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2)ELISA試劑盒

小鼠膠質(zhì)細胞系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)ELISA試劑盒

小鼠堿性成纖維細胞生長因子9(FGF9)ELISA試劑盒