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磁珠提取實(shí)時(shí)熒光定量PCR異常擴(kuò)增曲線分析
磁珠提取實(shí)時(shí)熒光定量PCR是現(xiàn)代分子生物學(xué)研究中*的手段，是一種敏感的放大系統(tǒng)。相比于傳統(tǒng)的臨床診斷方法，核酸診斷是分子水平上的診斷技術(shù)，可以彌補(bǔ)傳統(tǒng)臨床診斷方法的某些缺陷。
磁珠提取實(shí)時(shí)熒光定量PCR不僅具有普通PCR的高靈敏性，而且由于應(yīng)用了熒光探針，可以通過(guò)光電傳導(dǎo)系統(tǒng)直接探測(cè)PCR擴(kuò)增過(guò)程中熒光信號(hào)的變化以獲得定量結(jié)果，所以還具有DNA雜交的高特異性和光譜技術(shù)的高準(zhǔn)確性，克服了常規(guī)PCR的許多缺點(diǎn)。
將傳統(tǒng)PCR檢測(cè)模式中的PCR擴(kuò)增和檢測(cè)相結(jié)合（即在同一個(gè)密閉容器中將PCR擴(kuò)增反應(yīng)與熒光標(biāo)記探針檢測(cè)結(jié)合在一起）檢測(cè)目的核酸的檢驗(yàn)方法紛紛出臺(tái)。這樣的檢測(cè)方法稱為“實(shí)時(shí)”PCR，表示PCR擴(kuò)增產(chǎn)物可被實(shí)時(shí)檢測(cè)。
準(zhǔn)確地說(shuō)，“實(shí)時(shí)”是指在每一個(gè)PCR循環(huán)后檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物，當(dāng)PCR擴(kuò)增反應(yīng)結(jié)束后，我們可以得到每個(gè)樣品的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物變化曲線。通過(guò)分析這些反應(yīng)曲線，不但可以得到病原體的定性檢測(cè)結(jié)果，還可以對(duì)病原體的數(shù)量進(jìn)行準(zhǔn)確定量。
多組分圖擴(kuò)增曲線沒(méi)有抬升，是很明顯的陰性樣本，但是擴(kuò)增圖譜的擴(kuò)增曲線抬升了，這樣就會(huì)與閾值線相交，反而有了CT值。這是由于軟件在進(jìn)行基線自動(dòng)扣除的時(shí)候出現(xiàn)錯(cuò)誤，引起了擴(kuò)增曲線抬升。
出現(xiàn)這種情況可以采取手動(dòng)調(diào)整基線的方法，重新定義基線即可正常，即將基線起點(diǎn)改為熒光信號(hào)穩(wěn)定的循環(huán)數(shù)（一般是3），基線終點(diǎn)要改成擴(kuò)增曲線起峰的前一個(gè)循環(huán)數(shù)（比如起峰是在第25個(gè)循環(huán)，那基線的終點(diǎn)就是24）。引起這樣的原因是由于選用的耗材、試劑或者操作的原因?qū)е帘尘盁晒庑盘?hào)有所波動(dòng)，從而造成反應(yīng)孔的自動(dòng)基線扣除錯(cuò)誤。
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