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首先，先讓我們一起來看看熒光顯微成像技術(shù)的發(fā)展，所謂熒光，指的是當(dāng)分子受到光激發(fā)時，電子從基態(tài)躍遷到不穩(wěn)定狀態(tài)的激發(fā)態(tài)，電子從第一激發(fā)單重態(tài)的低振動能級回到基態(tài)并發(fā)出輻射的光，一般而言，熒光光譜主要包括兩種，一種是激發(fā)譜，而另外一種則是發(fā)射譜，其中激發(fā)譜是熒光物質(zhì)在不同波長的激發(fā)光作用下測得的某一波長處的熒光強(qiáng)度的變化情況，即不同波長的激發(fā)光的相對效率，而發(fā)射譜是某一固定波長的激發(fā)光作用下熒光強(qiáng)度在不同波長處的分布情況，即熒光中不同波長的光成分的相對強(qiáng)度。
受到光激發(fā)的分子，電子從基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài)，電子在吸收光的能量后，可能到達(dá)第一激發(fā)態(tài)的高振動能級或第二激發(fā)態(tài)，這個時候電子會經(jīng)歷內(nèi)轉(zhuǎn)換或馳豫振蕩過程到達(dá)第一激發(fā)態(tài)的低振動能級。由于激發(fā)態(tài)是不穩(wěn)定狀態(tài)，電子從第一激發(fā)單重態(tài)的低振動能級回到基態(tài)并發(fā)出輻射。
熒光顯微鏡是由光源、濾板系統(tǒng)和光學(xué)系統(tǒng)等主要部件組成，是利用一定波長的光激發(fā)標(biāo)本發(fā)射熒光，通過物鏡和目鏡系統(tǒng)放大以觀察標(biāo)本的熒光圖像。
以徠卡熒光顯微鏡為例，熒光顯微鏡也是光學(xué)顯微鏡的一種，主要區(qū)別是二者的激發(fā)波長不同，由此決定了熒光顯微鏡與普通光學(xué)顯微鏡結(jié)構(gòu)和使用方法上的不同。
1、照明方式通常為落射式，即光源通過物鏡投射于樣品上；
2、光源為紫外光，波長較短，分辨力率高于普通顯微鏡；
3、有兩個特殊的濾光片，光源前的用以濾除可見光，目鏡和物鏡之間的用于濾除紫外線，用以保護(hù)人眼。
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