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化學(xué)發(fā)光免疫分析包含免疫分析系統(tǒng)和化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)
在常溫下由化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生的光，產(chǎn)生電子能級(jí)處于激發(fā)態(tài)的物質(zhì)，后者通過(guò)躍遷釋放能量產(chǎn)生光子，從而導(dǎo)至的發(fā)光現(xiàn)象。化學(xué)發(fā)光是一個(gè)多步驟的過(guò)程。
學(xué)發(fā)光免疫分析(ChemiluminescenceImmunoassay，CLIA)誕生于1977年，是近十年來(lái)在世界范圍內(nèi)發(fā)展非常迅速的非放射性免疫分析，將高靈敏的化學(xué)發(fā)光技術(shù)與高特異性的免疫反應(yīng)結(jié)合起來(lái)建立的微量測(cè)定技術(shù)，因此該技術(shù)靈敏度高、線性范圍寬、應(yīng)用范圍廣。而且CLIA與放射免疫分析(RIA)、熒光免疫分析(IFA)及酶免疫分析(EIA)相比，操作簡(jiǎn)便、反應(yīng)快速、無(wú)放射污染，儀器簡(jiǎn)單穩(wěn)定且可以實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化。
化學(xué)發(fā)光免疫分析包含免疫分析系統(tǒng)和化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)。
免疫分析系統(tǒng)是指：抗原抗體標(biāo)記化學(xué)發(fā)光物質(zhì)或酶，經(jīng)過(guò)抗原與抗體反應(yīng)形成抗原-抗體免疫復(fù)合物。
化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)是指在免疫反應(yīng)結(jié)束后，利用化學(xué)發(fā)光物質(zhì)經(jīng)催化劑的催化和氧化劑的氧化，形成一個(gè)激發(fā)態(tài)的中間體，這種激發(fā)態(tài)中間體回到穩(wěn)定的基態(tài)時(shí)，同時(shí)發(fā)射出光子，利用發(fā)光信號(hào)測(cè)量?jī)x進(jìn)行檢測(cè)。根據(jù)化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物與發(fā)光強(qiáng)度的關(guān)系，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出被測(cè)物的含量。
ECL化學(xué)發(fā)光法是目前常用、靈敏的WesternBlot檢測(cè)方法。由于這些底物不會(huì)在膜表面沉淀、牢牢結(jié)合在膜上，因此可以通過(guò)一抗二抗去除液(Strippingbuffer)將親和結(jié)合的一抗和二抗去除。一抗二抗去除液既要足夠強(qiáng)烈而有效解離結(jié)合的抗體，也要足夠溫和使轉(zhuǎn)移的目標(biāo)蛋白仍能完整地留在NC膜或PVDF膜上。通過(guò)使用一抗二抗去除液，充分去除一抗二抗，可以非常方便地重新利用使用過(guò)的膜檢測(cè)其它蛋白。和重新跑一次SDS-PAGE膠相比，不僅省時(shí)省力，而且可以消除重新上樣而帶來(lái)的誤差，使可比性更強(qiáng)。
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