目前針對(duì)miRNA研究，已經(jīng)有很完整的體系，小優(yōu)也多次的對(duì)miRNA研究的其他技術(shù)進(jìn)行多次講解，本期是針對(duì)細(xì)胞水平miRNAs的定位研究--原位雜交（ISH）的介紹哦~

原位雜交技術(shù)（in situhybridization）是以標(biāo)記的核酸分子為探針，在組織細(xì)胞原位檢測(cè)特異核酸分子的技術(shù)。

圖注：miRNA原位雜交示意圖。左側(cè)為ISH在細(xì)胞/組織水平上的步驟，右側(cè)是分子水平上的步驟。紅色和綠點(diǎn)代表熒光團(tuán)，正方形代表非熒光配體。黑色的十字架表示miRNA的固定化。

在最早的ISH中，通常使用由DNA或RNA核苷酸組成的探針。未經(jīng)修飾的DNA和RNA探針對(duì)目標(biāo)序列的結(jié)合親和力相對(duì)較差，因此有人提出了一些修飾來改善它們的性質(zhì)，最早也是經(jīng)典的修飾就是LNA修飾，這仍然是RNA FISH的金標(biāo)準(zhǔn)。

圖注：LNA結(jié)構(gòu)圖

miRCURY LNA miRNA Detection Probe為經(jīng)典的LNA修飾miRNA ISH檢測(cè)探針，除此之外，對(duì)mRNA和lncRNA的檢測(cè)也有很大的幫助哦~
LNA探針已經(jīng)成功的使用在多種樣本類型中（圖3），包括whole mount，單細(xì)胞，冷凍切片及FFPE組織樣本等。

miRNA detection in FFPE

miRNA detection in zebrafish.

miRNA detection in chick.

LNA探針還可以用于核酸和蛋白的共定位，熒光標(biāo)記的探針與IHC同時(shí)進(jìn)行，更簡單獲得鮮明的結(jié)果哦~

Dual stain in normal mammary gland by ISH and (IHC) in a double-fluorescence assay.

Dual stain in ductal carcinoma in situ (DCIS) by ISH and  (IHC) in a double-fluorescence assay.

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