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遠(yuǎn)慕分享生物實(shí)驗(yàn)中常用電泳方法

來(lái)源:上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司   2022年07月27日 11:41  

 一、紙電泳 

指用濾紙作為支持載體的電泳方法。是最早使用的區(qū)帶電泳。

將濾紙條水平地架設(shè)在兩個(gè)裝有緩沖溶液的容器之間,樣品點(diǎn)于濾紙中央。當(dāng)濾紙條被緩沖液潤(rùn)濕后,再蓋上絕緣密封罩,即可由電泳電源輸入直流電壓(100V~1000V)進(jìn)行電泳。

二、醋酸纖維素薄膜電泳

電泳時(shí)經(jīng)過(guò)膜的預(yù)處理、加樣、電泳、染色、脫色與透明即可得到滿(mǎn)意的分離效果。此電泳的特點(diǎn)是分離速度快、電泳時(shí)間短、樣品用量少。因此特別適合于病理情況下微量異常蛋白的檢測(cè)。

三、凝膠電泳

由區(qū)帶電泳中派生出的一種用凝膠物質(zhì)作支持物進(jìn)行電泳的方式。

凝膠電泳中的瓊脂糖凝膠電泳和聚丙烯/酰胺凝膠電泳是普通電泳中應(yīng)用最多的兩種形式。

目前,這種辦法被廣泛用來(lái)分析蛋白質(zhì)和核酸。

四、等電聚焦電泳

1.等電聚焦電泳過(guò)程  

一種利用有pH值梯度的介質(zhì),分離等電點(diǎn)不同的蛋白質(zhì)的電泳技術(shù)。

在一個(gè)穩(wěn)定連續(xù)的線(xiàn)性pH梯度的溶液(兩性載體電解質(zhì))中進(jìn)行分離,每一種被分離的兩性物質(zhì)都移向與它的等電點(diǎn)相一致的pH位置,在那里不再移動(dòng)(稱(chēng)為聚焦)。

2.等電聚焦電泳的特點(diǎn)

①使用兩性載體電解質(zhì),在電極之間形成穩(wěn)定、連續(xù)、線(xiàn)性的pH梯度;

②由于“聚焦效應(yīng)”,即使很小的樣品也能獲得清晰、鮮明的區(qū)帶界面;

③電泳速度快;④分辨率高;

⑤加入樣品的位置可任意選擇;

⑥可用于測(cè)定蛋白質(zhì)類(lèi)物質(zhì)的等電點(diǎn);

⑦適用于中、大分子量(如蛋白質(zhì)、肽類(lèi)、同工酶等)生物組分的分離分析。

五、等速電泳

采用兩種不同濃度的電解質(zhì),一種為前導(dǎo)電解質(zhì),充滿(mǎn)整個(gè)毛細(xì)管柱;另一種為尾隨電解質(zhì),置于一端的電泳槽中。前導(dǎo)電解質(zhì)的遷移率高于任何樣品組分,尾隨電解質(zhì)則低于任何樣品組分,被分離的組分按其不同的遷移率夾在中間,在強(qiáng)電場(chǎng)的作用下,各被分離組分在前導(dǎo)電解質(zhì)與尾隨電解質(zhì)之間的空隙中移動(dòng),實(shí)現(xiàn)分離。

六、雙向凝膠電泳(二維電泳)

第一向采用等電聚焦 根據(jù)復(fù)雜的蛋白質(zhì)成分中各個(gè)蛋白質(zhì)的PI的不同,將蛋白質(zhì)進(jìn)行分離。

第二向采用了十二烷基硫酸鈉一聚丙烯/酰胺凝膠電泳 (SDS-PAGE)就是按蛋白質(zhì)分子量的大小使其在垂直方向進(jìn)行分離。其結(jié)果不再是條帶狀,而是呈現(xiàn)為斑點(diǎn)狀。

七、免疫電泳

免疫電泳是瓊脂平板電泳和雙相免疫擴(kuò)散兩種方法的結(jié)合。將抗原樣品在瓊脂平板上先進(jìn)行電泳,使其中的各種成分因電泳遷移率的不同而彼此分開(kāi);然后加入抗體做雙相免疫擴(kuò)散,把已分離的各抗原成分與抗體在瓊脂中擴(kuò)散而相遇,在二者比例適當(dāng)?shù)牡胤?,形成肉眼可?jiàn)的沉淀弧。

 

 

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