重組蛋白是應(yīng)用重組DNA或重組RNA的技術(shù),從而獲得具有一定功能和活性的蛋白質(zhì),是研究生物學(xué)過程的重要工具,被廣泛應(yīng)用于蛋白結(jié)構(gòu)研究、細胞功能試驗、免疫檢測試劑、重組蛋白藥物、診斷試劑開發(fā)等眾多領(lǐng)域。
體外重組蛋白的生產(chǎn)主要包括四大系統(tǒng):原核蛋白表達,哺乳動物細胞蛋白表達,酵母蛋白表達及昆蟲細胞蛋白表達。
重組蛋白表達系統(tǒng)介紹:
(1)目前應(yīng)用較廣泛的表達系統(tǒng)有三大類,大腸桿菌(Esherichia coli)表達系統(tǒng)、酵母表達系統(tǒng)、CHO細胞表達系統(tǒng)。其中,大腸桿菌是表達重組蛋白常用的宿主菌,已應(yīng)用于許多具有重要藥用價值蛋白的生產(chǎn)。大腸桿菌表達系統(tǒng)具有許多優(yōu)點,如生長快、培養(yǎng)成本低、遺傳背景清楚和易實現(xiàn)高密度培養(yǎng)等。大腸桿菌DH5α是一種誘變菌株,主要表現(xiàn)對外源DNA的免疫缺乏。大腸桿菌DH5α是基因工程常用的宿主菌之一,相比于正常菌種缺少了一定的免疫機制。
(2)不同的表達系統(tǒng)和培養(yǎng)方法顯著影響下游的處理過程,目標蛋白表達是否形成包涵體,目標蛋白表達的定位(胞內(nèi)、細胞膜內(nèi)、周質(zhì)空間和胞外),蛋白表達的量都依賴于所選擇的的表達系統(tǒng)。
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