流式細(xì)胞術(shù)是當(dāng)代細(xì)胞分析技術(shù)之一，包括細(xì)胞計(jì)數(shù)、細(xì)胞內(nèi)/外抗原分子檢測(cè)、細(xì)胞中DNA和RNA的倍體分析、細(xì)胞的生物學(xué)特性及功能分析等。

對(duì)于流式細(xì)胞分析而言，樣本制備的好壞對(duì)最終的檢測(cè)結(jié)果有很大的影響。在免疫學(xué)和血液學(xué)中，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)分析的樣本多為外周血、骨髓、各類(lèi)體液（如腦脊液、胸水、腹水）以及人體的組織（如淋巴結(jié)、脾、肝等），這幾種樣本要如何制備和保存呢？

外周血/骨髓

1. 保存方法

收集樣本后置于加有抗凝劑（一般選擇肝素或EDTA）的試管中，室溫保存，盡量在12 h內(nèi)處理樣本；若無(wú)法及時(shí)處理，4℃保存，此時(shí)最好選擇肝素抗凝管。

2. 處理方法

一般不需要特殊處理制備單細(xì)胞懸液，所用試劑為淋巴細(xì)胞分離液和紅細(xì)胞裂解液。但在臨床檢測(cè)中，為了避免細(xì)胞成分丟失，通常不推薦使用淋巴細(xì)胞分離液分離單核細(xì)胞。

3. 抗凝劑的選擇

血液標(biāo)本可以使用EDTA、ACD（枸櫞酸葡萄糖）或肝素抗凝。

一般認(rèn)為，ACD和肝素抗凝的樣本72 h內(nèi)細(xì)胞是穩(wěn)定的；EDTA抗凝48 h內(nèi)是穩(wěn)定的。

EDTA適用于白細(xì)胞的免疫表型分析，可防止成熟的髓系細(xì)胞貼壁造成細(xì)胞損失，并具有較強(qiáng)的抗血小板凝集能力，但對(duì)細(xì)胞活性的保持不如肝素抗凝。同時(shí)EDTA是二價(jià)陽(yáng)離子的強(qiáng)螯合劑，會(huì)影響與Ca2+相關(guān)的抗原位點(diǎn)（如CD11b等），并會(huì)抑制與Ca2+ 相關(guān)的細(xì)胞功能。肝素常用于白細(xì)胞功能研究，可維持Ca2+和Mg2+在細(xì)胞內(nèi)的生理濃度，更好保持細(xì)胞活性，適用于放置時(shí)間較長(zhǎng)、不能及時(shí)檢測(cè)的樣本，但不適合血小板的相關(guān)檢測(cè)。

骨髓樣本優(yōu)先選擇肝素抗凝。

體液

1. 保存方法

收集樣本后置于肝素抗凝管中，室溫保存，且盡量在12 h內(nèi)處理樣本。若無(wú)法及時(shí)處理，則4℃保存，時(shí)間最好不超過(guò)48 h。

2. 處理方法

3. 樣本1000-1500 rpm離心5 min，棄去上清；

4. 加入含有0.1%牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液（PBS），離心洗滌5 min；

5. 加入適量PBS重懸。如有細(xì)小沉淀，用300目尼龍網(wǎng)過(guò)濾后備用。

組織