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96孔培養(yǎng)板在細胞操作中也嚴格遵循無菌原則，操作過程中要做到規(guī)范、科學(xué)，不會影響細胞生長。其中最常見的問題是如何保證細胞在加樣后均勻化，并盡量減少換液對細胞生長狀態(tài)的影響。請問如何將細胞混合在一起？是滴管吹打還是振蕩培養(yǎng)皿？如果是后一種情況，那么細胞就會因為離心力的作用而被甩到周圍，導(dǎo)致細胞越少，細胞就越多！
這里提供了一個很好的方法：將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱中，在培養(yǎng)皿中浸泡幾個小時，然后將培養(yǎng)皿放入培養(yǎng)皿中，使培養(yǎng)皿內(nèi)的細胞生長均勻。記住，不要使用振蕩器振蕩，否則細胞會像你所說的那樣聚集起來。
培養(yǎng)板的孔徑越小，這種現(xiàn)象就越明顯，24孔和96孔板是不可避免的，因為液體的附壁使孔內(nèi)培養(yǎng)液不是在液面上，而是像凹鏡一樣高，而使用這兩種孔板，由于需要干預(yù)等原因，不能加足夠的培養(yǎng)液，導(dǎo)致細胞和培養(yǎng)液一起出現(xiàn)“邊集”現(xiàn)象，如果要在孔中央也有均勻的細胞，就必須增加接種細胞的數(shù)量。
在消化細胞的時候要注意吹打均勻，避免細胞成團，同時要保證孔內(nèi)培養(yǎng)液的量，一般情況下，接種時要加足夠的培養(yǎng)液，干預(yù)液和培養(yǎng)液的量等于接種時培養(yǎng)液的量，這樣就能改變“邊集”現(xiàn)象，值得一試。
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