Jackson公司直接和間接蛋白質(zhì)印跡前言：

蛋白質(zhì)印跡是一種強(qiáng)大的技術(shù)，它使用抗體來檢測通過電泳分離后固定在印跡膜上的蛋白質(zhì)。該技術(shù)可以直接或間接執(zhí)行。每種方法都可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求提供優(yōu)勢。

一旦通過凝膠電泳分離蛋白質(zhì)并轉(zhuǎn)移到印跡膜上，就可以通過一個或兩個步驟進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡。

Jackson公司：直接——一步法

在直接檢測方法中（圖 1 (A)），在單個孵育步驟后，直接與報(bào)告酶或熒光染料偶聯(lián)的一抗用于檢測印跡膜上的蛋白質(zhì)抗原。雖然這種一步法速度更快，但并未廣泛使用。圖1（B）說明了直接偶聯(lián)一抗的問題之一，報(bào)告分子可以封閉一抗的抗原結(jié)合區(qū)，阻礙對抗原的良好識別，導(dǎo)致靈敏度降低。 過量的初級可以補(bǔ)償這種影響，但可能導(dǎo)致重現(xiàn)性差和背景增加。

Jackson公司：間接——兩步法

Western blotting的兩步間接檢測方法避免了對抗原檢測的干擾。未標(biāo)記的一抗與結(jié)合在印跡膜上的抗原形成復(fù)合物。洗滌后，印跡與偶聯(lián)有報(bào)道酶或熒光團(tuán)的二抗一起孵育。多個二抗與一抗上的表位結(jié)合，形成標(biāo)記的抗原-抗體復(fù)合物（圖 1(C)）。盡管間接方法需要一個額外的洗滌和孵育步驟，但與直接方法相比，它具有許多優(yōu)勢，包括信號放大和靈活性。

下表詳述了直接和間接檢測方法的優(yōu)缺點(diǎn)。它們適用于蛋白質(zhì)印跡，但也可能與其他技術(shù)相關(guān)，例如 IHC/ICC、ELISA 和流式細(xì)胞術(shù)。

備注：

圖 1：(A) 直接偶聯(lián)的一抗與結(jié)合在膜上的抗原結(jié)合。(B) 直接偶聯(lián)的一抗與與膜結(jié)合的抗原結(jié)合較差，因?yàn)閳?bào)告酶或熒光團(tuán)可以偶聯(lián)到抗原結(jié)合區(qū)域并降低抗體對其靶標(biāo)的親和力。使用輔助消除了這一點(diǎn)。(C) 間接方法 - 多個偶聯(lián)二抗與未偶聯(lián)一抗結(jié)合。

表 1：直接和間接西方印跡方法的優(yōu)缺點(diǎn)。

參考文獻(xiàn)：

Alberts B et al (1994) Molecular biology of the Cell. 3rd Ed. Garland press. London

Roitt et al (2005) Immunology. 6th Ed. Mosby. Spain

Jackson公司專注于親和純化的二抗和純化免疫球蛋白研究，服務(wù)領(lǐng)域覆蓋各大學(xué)科研所和醫(yī)院里的動物研究以及生物醫(yī)學(xué)研究機(jī)構(gòu)的科學(xué)家。艾美捷科技是Jackson公司的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。