對(duì)于競(jìng)爭(zhēng)法也需要注意一點(diǎn)，酶標(biāo)記抗原和待測(cè)樣本一定要事先混勻好，然后同時(shí)加入固相載體，不然會(huì)造成平競(jìng)爭(zhēng)，檢測(cè)出現(xiàn)偏差；抗體的檢測(cè)設(shè)計(jì) 就方法來(lái)說(shuō)，有間接法、雙抗原夾心法、競(jìng)爭(zhēng)法和捕獲法四種設(shè)計(jì)。

 1、 間接法。操作步驟與雙抗夾心一樣，只是包被是純化的相應(yīng)抗原而不是抗體了，加入樣品后洗滌，再加入的酶標(biāo)記抗抗體，然后顯色，顏色深淺與樣品中待測(cè)抗體的濃度正相關(guān)。這個(gè)間接法的原理和步驟與雙抗夾心一樣一樣的，為了區(qū)分就把包被抗原檢測(cè)抗體叫做間接法了，以此類推，之前的雙抗夾心法也可以叫做直接法，命名其實(shí)就是這么回事，規(guī)則多了就容易讓人糊涂。間接法也有一些自己的特點(diǎn)，1.酶標(biāo)記抗抗體可選擇性檢測(cè)抗體的亞型，可用于鑒別感染時(shí)期，如果是IgM那么提示感染早期；2.酶標(biāo)抗抗體檢測(cè)抗體特異性不高，容易產(chǎn)生假陽(yáng)性，如果封閉不*，可出現(xiàn)全板陽(yáng)性，挺嚇人的。臨床上常用該方法檢測(cè)抗HCV抗體、抗HEV抗體、抗CMV抗體、抗HSV抗體、抗沙眼衣原體抗體等等。

2、 雙抗原夾心法，這個(gè)*是山寨雙抗夾心法的。與間接法相比，具有*的靈敏度和特異性，但不是很常用，因?yàn)榫湍壳暗募夹g(shù)條件，想得到能用于ELISA檢測(cè)的純化抗原還是有一定的難度。臨床上常用于檢測(cè)HIV抗體初篩，TP抗體和抗HBs抗體等，這些檢測(cè)對(duì)特異性和靈敏度，準(zhǔn)確性都要求特別高。

3、 競(jìng)爭(zhēng)法，和檢測(cè)抗原設(shè)計(jì)的競(jìng)爭(zhēng)法*一致，臨床上用的不多，我仔細(xì)總結(jié)了一下兩個(gè)很具有代表性的，也各具特點(diǎn)。1、抗HBc抗體，檢測(cè)方法與抗原相同，包被抗原之后，分兩組，一組加入預(yù)先混勻的酶標(biāo)抗體和待測(cè)樣品，一組只加入酶標(biāo)抗體，兩組的顯色之差可代表待測(cè)抗體的相對(duì)含量，需注意的是待測(cè)抗體與酶標(biāo)抗體是同一物質(zhì)；2、抗HBe抗體檢測(cè)，方法與抗原競(jìng)爭(zhēng)法設(shè)計(jì)稍有區(qū)別，包被的抗HBe抗體后，檢測(cè)也分兩組，一組先加入酶標(biāo)HBeAg再立即加入待測(cè)樣品，一組只加酶標(biāo)HBeAg，兩組顯色之差代表待測(cè)抗體的相對(duì)含量，這種設(shè)計(jì)中包被抗體和待測(cè)抗體是同一物質(zhì)。值得注意的是混合組不是事先混勻再加入，而是先加入待測(cè)抗體后再加入酶標(biāo)抗原。所有的這些復(fù)雜的注意事項(xiàng)確實(shí)很容易把人搞暈，但是童鞋們只需要記住一條，競(jìng)爭(zhēng)很殘酷，我們就要想盡一切辦法保證競(jìng)爭(zhēng)的公平性，這樣就不會(huì)錯(cuò)。

4、 捕獲法，這種方法比較少用，由于具有識(shí)別抗體類型的優(yōu)點(diǎn)，僅用于需要早期診斷的急性感染或者具有爆發(fā)性感染的疾病，如HAV-IgM、HBc-IgM、ToRCH等等。原理還是逃不脫經(jīng)典的雙抗夾心，具體方法是先包被能識(shí)別抗體類別的抗抗體，洗滌后加樣品，再洗滌，加酶標(biāo)記抗原，洗滌后顯色，這些步驟閉上眼睛都能寫(xiě)出來(lái)。