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ELISA試劑盒又稱為酶聯(lián)免疫試劑盒，是現(xiàn)在很多生物制藥廠和醫(yī)療實(shí)驗(yàn)室常用的檢測(cè)設(shè)備，主要的試驗(yàn)方法就是酶聯(lián)免疫吸附方法。
ELISA是將酶催化的放大作用與特異性抗原抗體反應(yīng)結(jié)合起來(lái)的一種微量分析技術(shù)。酶標(biāo)記抗原或抗體以后，既不影響抗原抗體反應(yīng)的特異性，也不改變酶本身的活性。因?yàn)镋LISA試劑盒價(jià)格低廉且準(zhǔn)確性搞、反應(yīng)時(shí)間短等優(yōu)點(diǎn)，所以適合大批量的檢測(cè)，一般常常用于食品安全檢測(cè)方面。
ELISA試劑盒17個(gè)相關(guān)操作技巧如下:
1.切記在加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
2.合理安排檢測(cè)量,以免反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。
3.在吸取液體時(shí),要用量程和需要量接近的槍去吸,減少誤差。
4.務(wù)必做雙孔實(shí)驗(yàn),這樣才既能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性,又能反映出試劑盒的精密度。
5.樣品稀釋液應(yīng)用加液器加注,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性。
6.為防止樣品蒸發(fā),試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),酶標(biāo)板加上蓋或覆膜。
7.未使用完的酶標(biāo)板或者試劑,請(qǐng)于2-8℃保存。過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗人IgG工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用。請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過(guò)的過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗人IgG工作液。
8.ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中,加樣后及時(shí)放人孵箱,標(biāo)本較多時(shí),要分批操作。按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間,防止孵育時(shí)間人為延長(zhǎng),導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。
9.剩余樣品及廢棄物應(yīng)經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘,或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。
10.人ELISA試劑盒洗滌時(shí)各孔均需加滿液體,防止孔口有游離酶不能洗凈。
11.每次實(shí)驗(yàn)留一孔作為空白調(diào)零孔,該孔不加任何試劑,只是最后加底物溶液及2N H2SO4。測(cè)量時(shí)先用此孔調(diào)OD值至零。
12.手工洗板時(shí)每次加入洗滌液后。應(yīng)靜置15～30s,不要將一個(gè)酶標(biāo)孑L中的洗滌液濺入另一酶標(biāo)孔中,防止交叉污染。甩去洗滌液后將酶標(biāo)板放在毛巾或吸水紙上拍干。
13.對(duì)樣本的結(jié)果有疑問(wèn)時(shí)需要使用其他檢測(cè)方法進(jìn)行驗(yàn)證。
14.沒(méi)有去離子水或雙蒸水時(shí),可以使用娃哈哈純凈水配制溶液,切勿使用自來(lái)水。
15.在使用微量加樣器時(shí),吸取不同瓶子中液體后要更換槍頭,即使吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
16.吸取液體時(shí)速度不易太快,以免產(chǎn)生氣泡,人ELISA試劑盒吸取的量不夠準(zhǔn)確。
17.吸取液體時(shí)要選用量程和需要量接近的微量加樣器吸,減少誤差。
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