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美國cellscript試劑盒包括用于體外轉(zhuǎn)錄的試劑盒以及使用帽類似物或加帽酶的5' RNA加帽的試劑盒。
l mRNA為什么要加帽:
1、防止5'末端被降解。
2、在細胞中,幫助成熟mRNA穿過核膜,進入胞質(zhì)。
3、增強翻譯。
4、幫助后續(xù)可變剪接的過程。
l 加帽類型:
1、Cap 0型(m7G5ppp5Np):僅所加的鳥嘌呤核苷酸被甲基化,存在于單細胞。
2、Cap I型(m7G5ppp5NmpNp):轉(zhuǎn)錄本第一個核苷酸的2'-O位也被甲基化,普遍存在于所有細胞。
3、Cap II型(m7G5ppp5NmpNmpNp):轉(zhuǎn)錄本第一和第二位的2'-O位都甲基化,存在于10%-15%細胞中。
l 體外加帽的必要條件:
1、在基因組全長克隆時,必須在正向引物5'末端添加T7強啟動子序列。
2、以T7啟動子作為體外轉(zhuǎn)錄啟動子。
3、在正向引物5'末端加一個“蓋帽G”,有利于提高體外轉(zhuǎn)錄得到的RNA分子的侵染活性。
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 簡介 |
T7 mScript™ Standard mRNA Production System | C-MSC11610 | 10次 | 用于體外mRNA的轉(zhuǎn)錄過程, 將高產(chǎn)量轉(zhuǎn)錄與轉(zhuǎn)錄后加帽和加尾的優(yōu)點集于一身。 |
C-MSC100625 | 25次 | ||
T7-FlashScribe™ Transcription Kit | C-ASF3507 | 50次 | 用于使用T7 RNA聚合酶和經(jīng)典(GAUC) NTP生產(chǎn)體外轉(zhuǎn)錄的RNA。 |
T7-Scribe™ Standard RNA IVT Kit | C-AS3107 | 50次 | |
SP6-Scribe™ Standard RNA IVT Kit | C-AS3106 | 50次 | 用于使用 SP6 RNA 聚合酶和經(jīng)典 (GAUC) NTP 生產(chǎn)體外轉(zhuǎn)錄的 RNA。 |
ScriptCap™ m7G Capping System | C-SCCE0625 | 25次 | 用于使用 ScriptCap Capping Enzyme、GTP 和SAM對體外轉(zhuǎn)錄的RNA進行轉(zhuǎn)錄后加帽。可進行cap0和cap1加帽。 |
ScriptCap™ 2'-O-Methyltransferase Kit | C-SCMT0625 | 25次 | 用于將含有Cap 0帽的RNA轉(zhuǎn)化為 含有Cap I帽的 RNA。 |
ScriptCap™ Cap 1 Capping System | C-SCCS1710 | 10次 | 用于使用ScriptCap 加帽酶、ScriptCap 2'-O-甲基轉(zhuǎn)移酶、GTP和SAM對體外轉(zhuǎn)錄的RNA進行轉(zhuǎn)錄后加帽。Cap 0和Cap I可分別加帽。 |
l 美國cellscript試劑盒(C-SCCS1710)原理:
ScriptCap™ Cap 1 Capping System可提供ScriptCap Capping Enzyme和ScriptCap 2'-O-Methyltransferase兩種酶進行蓋帽過程。其中,ScriptCap Capping Enzyme可在體外通過三種酶促反應催化一個cap nucleotide(帽核苷酸)連接到具有5'-三磷酸基團的初始RNA的5'末端 ,從而形成Cap 0,其表現(xiàn)形式是:m7G(5')ppp(5')N1(pN)x-OH(3') 。(m7G代表N7-甲基鳥苷帽核苷,ppp三磷酸鏈接帽苷碳端和RNA氮端,N1(pN)x-OH(3') 代表初始轉(zhuǎn)錄后RNA)。
ScriptCap 2'-O-Methyltransferase可介導Cap 0到Cap I的蓋帽過程,其可從供體SAM(S-腺苷甲硫氨酸)中轉(zhuǎn)移一個甲基到Cap 0的2'位置,從而形成Cap I。
l 美國cellscript試劑盒(C-SCCS1710)特點:
1. ScriptCap™ Cap 1 Capping System提供ScriptCap Capping Enzyme和ScriptCap 2'-O-Methyltransferase(2'氧甲基轉(zhuǎn)移酶),可在RNA的5'末端產(chǎn)生Cap 0或Cap I帽結(jié)構(gòu),也可單獨獲得Cap 0或Cap I。
2. 反應后的Cap RNA可直接進行Poly(A)聚合反應,無需再次進行處理,可方便進行后續(xù)的翻譯過程。
3. ScriptCap Cap I Capping System改進了共轉(zhuǎn)錄加帽方法,使其加帽效率可以接近100%,所有加帽RNA均能夠大量且正確產(chǎn)生,最終可以以合理的成本獲得大量且正確的加帽RNA 。
l 美國cellscript試劑盒(C-SCCS1710)應用:
該產(chǎn)品多用于用于動物體外RNA轉(zhuǎn)錄合成過程,以進行5'末端的Cap 0或Cap 1結(jié)構(gòu)的產(chǎn)生,提高體外RNA的穩(wěn)定性和翻譯效率。
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